| 奶牛生物钟基因BMAL1真核表达载体的构建及生物信息学分析 |
| |
| 引用本文： | 徐皓东,王逸群,刘祖培,李丹,张海森,李雅婷,江海圳,靳亚平,陈华涛.奶牛生物钟基因BMAL1真核表达载体的构建及生物信息学分析[J].中国畜牧杂志,2023(4):161-167. |
| |
| 作者姓名： | 徐皓东 王逸群 刘祖培 李丹 张海森 李雅婷 江海圳 靳亚平 陈华涛 |
| |
| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学动物医学院;2. 西北农林科技大学农业农村部动物生物技术重点实验室 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目（31771301）；;中国博士后科学基金第11批特别资助（2018T111112）； |
| |
| 摘 要： | 本研究旨在克隆奶牛脑肌类芳香烃受体核转位蛋白1基因（Brain and Muscle Arnt-Like Protein 1,BMAL1）的蛋白编码序列（Coding Sequence,CDS）并构建其真核表达载体，运用生物信息学方法解析其CDS序列和编码蛋白特性。以牛肝脏组织为材料，利用PCR技术扩增奶牛BMAL1基因中带有同源臂的CDS片段。采用同源重组法，将目的片段连接至酶切线性化的pc DNA3.1-Puro-N-3HA真核表达载体上，酶切及测序结果均符合预期的质粒命名为pc DNA3.1-3HA-c BMAL1。将空载与重组质粒分别转染至HEK293T细胞，通过实时荧光定量PCR技术（q PCR）和Western Blotting技术检验奶牛BMAL1基因的过表达效果，并利用生物信息学软件分析BMAL1基因CDS区及其编码蛋白的特性和功能。结果显示，pc DNA3.1-3HA-c BMAL1真核表达载体构建成功，将该质粒转染至HEK293T细胞后，成功实现了BMAL1在m RNA和蛋白水平的过表达；牛BAML1基因与绵羊、山羊同源性最高，BMAL1蛋白为不稳定蛋白，其上不存在...
|
| 关 键 词： | 奶牛 BMAL1 生物钟 载体构建 生物信息学 |
|
|
