鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和应用 |
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引用本文: | 余斌,华炯钢,刘跃生,赵灵燕,倪征,叶伟成,云涛,陈柳,徐辉,张存.鸭坦布苏病毒抗体间接ELISA检测方法的建立和应用[J].浙江畜牧兽医,2014(5). |
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作者姓名: | 余斌 华炯钢 刘跃生 赵灵燕 倪征 叶伟成 云涛 陈柳 徐辉 张存 |
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作者单位: | 浙江省农业科学院畜牧兽医研究所;嘉兴职业技术学院;浙江省动物疫病预防控制中心; |
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基金项目: | 浙江省重点科技创新团队(2010R50027);浙江省科技计划项目(2011C14011);浙江省“三农六方”项目;嘉兴市科技研究计划项目(2012AY1063) |
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摘 要: | 为建立特异性和敏感性较高的鸭坦布苏病毒(DTMUV)抗体检测方法,采用原核表达系统对DTMUV E蛋白的DⅢ结构域进行了双串联融合表达,SDS-PAGE电泳结果显示目的蛋白大小约25 Ku。Western blot结果显示,经亲和层析纯化的重组蛋白能与DTMUV阳性血清发生特异性反应。以纯化的重组DⅢ蛋白作为包被抗原,初步建立了检测DTMUV血清抗体的间接ELISA方法。采用梯度稀释法对ELISA各种反应条件进行优化,确定最适工作条件。重组抗原最适包被浓度为5μg/mL,血清的最佳稀释度为1∶100,兔抗鸭酶标抗体最适稀释度为1∶1000;抗体临界值S/P≥0.336判定为阳性,S/P≤0.287判定为阴性,介于两者之间为可疑。该方法检测禽流感病毒、鸭源新城疫、鸭甲肝病毒、鸭圆环病毒、鸭细小病毒、经典呼肠孤病毒及新型鸭呼肠孤病毒等血清均为阴性,4个批次批内与批间重复试验的OD值变异系数分别为6.21%~7.27%和3.4%~7.2%,显示该法具有很好的特异性、稳定性和重复性。用建立的间接ELISA与中和试验分别对108份疑似鸭坦布苏病血清样品进行检测,两种方法的阳性符合率为83.3%。
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关 键 词: | 鸭坦布苏病毒 DⅢ结构域 串联表达 间接酶联免疫吸附试验 |
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