| PRRSV GP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达 |
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| 引用本文： | 许瑞勤,郭嘉,魏凤灵,冯延,马思续,张留君,李想通,李闻,孙杨杨,杨国宇,夏平安,张改平.PRRSV GP5蛋白在杆状病毒表达系统中的表达[J].中国兽医学报,2019(4):609-614,621. |
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| 作者姓名： | 许瑞勤 郭嘉 魏凤灵 冯延 马思续 张留君 李想通 李闻 孙杨杨 杨国宇 夏平安 张改平 |
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| 作者单位： | 1.河南农业大学牧医工程学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金重大资助项目(31490600);国家自然科学基金资助项目(31572520) |
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| 摘 要： | 参照包含猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV) VR2332株完整ORF5基因的载体pMD18T-ORF5的核酸序列设计引物,扩增全长的PRRSV ORF5基因片段,同时以SOE-PCR技术扩增缺失信号肽和跨膜区的ORF5核酸片段ORF5NC,分别克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统的供体质粒pFastBac-HTA,获得重组转移载体pFastBacHTA-ORF5及截短表达的重组转移载体pFastBacHTA-ORF5NC。将供体质粒分别转化DH10Bac细胞,获得重组穿梭质粒,转染Sf9昆虫细胞,获得重组杆状病毒。SDS-PAGE和Western blot检测结果表明,在Sf9细胞中分别成功表达了全长的GP5重组蛋白和缺失信号肽、跨膜区的截短GP5重组蛋白。2种重组蛋白经纯化后,免疫小鼠制备抗血清,ELISA方法检测免疫GP5全长和截短重组蛋白的小鼠血清中抗体滴度分别为1∶800和1∶1 600,表明重组蛋白具有良好的免疫原性。本试验为进一步分析重组蛋白诱导中和抗体产生的能力以及为PRRSV基因工程亚单位疫苗的研究奠定基础。
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| 关 键 词： | PRRSV GP5 杆状病毒表达系统 真核表达 |
Expression of glycoprotein 5 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in baculovirus expression system |
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| XU Rui-qin,GUO Jia,WEI Feng-ling,FENG Yan,MA Si-xu,ZHANG Liu-jun,LI Xiang-tong,LI Wen,SUN Yang-yang,YANG Guo-yu,XIA Ping-an,ZHANG Gai-ping.Expression of glycoprotein 5 of porcine reproductive and respiratory syndrome virus in baculovirus expression system[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2019(4):609-614,621. |
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| Authors: | XU Rui-qin GUO Jia WEI Feng-ling FENG Yan MA Si-xu ZHANG Liu-jun LI Xiang-tong LI Wen SUN Yang-yang YANG Guo-yu XIA Ping-an ZHANG Gai-ping |
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| Affiliation: | (College of Animal Science and. Veterinary Medicine ,Henan Agricultural University ^Zhengzhou 450002,China) |
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| Abstract: | XU Rui-qin;GUO Jia;WEI Feng-ling;FENG Yan;MA Si-xu;ZHANG Liu-jun;LI Xiang-tong;LI Wen;SUN Yang-yang;YANG Guo-yu;XIA Ping-an;ZHANG Gai-ping(College of Animal Science and. Veterinary Medicine ,Henan Agricultural University ^Zhengzhou 450002,China) |
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| Keywords: | PRRSV GP5 baculovirus expression system eukaryotic expression |
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