线粒体融合蛋白2基因干扰与过表达对布鲁氏菌诱导巨噬细胞凋亡的影响

目的] 试验旨在探究线粒体融合蛋白2（MFN2）基因干扰与过表达对布鲁氏菌诱导小鼠巨噬细胞凋亡的影响。方法] 利用RNA干扰技术设计3条特异性针对MFN2基因的siRNA序列（siMFN2-450、siMFN2-1661、siMFN2-2275）和1条阴性干扰序列（siMFN2-Negative）；利用空质粒pcDNA3.1-EGFP通过过表达技术构建1个重组质粒pcDNA3.1-EGFP-MFN2。双酶切法鉴定过表达重组质粒pcDNA3.1-EGFP-MFN2，通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测筛选最佳干扰序列并鉴定重组质粒的过表达效率，使用筛选出的最佳干扰序列和鉴定过表达后的重组质粒分别构建MFN2基因干扰及过表达的转染巨噬细胞模型；用牛种布鲁氏菌疫苗株A19侵染巨噬细胞，按照细菌数：细胞个数=100：1的比例侵染24 h，通过实时荧光定量PCR和Western blotting检测B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）相关X蛋白（BAX）的表达情况，用流式细胞术检测细胞凋亡情况。结果] 双酶切结果显示，pcDNA3.1-EGFP-MFN2过表达重组质粒构建成功；实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示，siMFN2-1661组MFN2的表达极显著降低（P<0.01），pcDNA3.1-EGFP-MFN2组MFN2的表达极显著增加（P<0.01），成功构建干扰及过表达MFN2基因的转染巨噬细胞模型；布鲁氏菌侵染干扰MFN2基因表达的巨噬细胞后，BAX蛋白表达水平显著高于siMFN2-Negative组（P<0.05），BAX转录水平和细胞凋亡率极显著高于siMFN2-Negative组（P<0.01）；布鲁氏菌侵染过表达MFN2基因的巨噬细胞后，BAX的转录及蛋白表达水平均显著低于pcDNA3.1-EGFP组（P<0.05），细胞凋亡率极显著低于pcDNA3.1-EGFP组（P<0.01）。结论] 本试验结果表明，干扰MFN2基因的表达会增强布鲁氏菌诱导细胞凋亡的能力，而过表达MFN2基因则会抑制布鲁氏菌诱导细胞凋亡的能力，结果可为研究MFN2基因的生物学功能提供参考，为进一步解析布鲁氏菌的致病机制提供理论基础。

Effects of Mitochondrial Fusion Protein 2 Gene Interference and Overexpression on Macrophage Apoptosis Induced by Brucella