羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因在杆状病毒中的串联表达

本研究通过构建含有3拷贝羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因的重组杆状病毒，旨在通过昆虫细胞表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白，为原核表达和真核表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白的免疫效果的比较奠定了基础。将细粒棘球蚴EG95s基因与3拷贝羊C3d基因串联，插入pTarget载体，获得重组质粒pTarget-EG95-(C3d)3，利用BamH Ⅰ和Xba Ⅰ双酶切位点将目的基因EG95-(C3d)3克隆至Bac-to-Bac系统的转移载体pFastBac-Hta中，获得pFastBacHta-EG95-(C3d)3重组质粒，将该重组质粒转化含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中进行转座重组，获得携带3拷贝羊C3d基因与细粒棘球蚴EG95s基因的重组转座子rBacmid-EG95-(C3d)3，转染Sf9昆虫细胞后获得EG95-(C3d)3重组杆状病毒，并表达EG95- (C3d)3重组融合蛋白，采用SDS-PAGE和Western blotting进行重组蛋白的鉴定。同时利用昆虫细胞表达蛋白对羊棘球蚴病特异性抗体进行检测。结果表明，获得了EG95-(C3d)3重组杆状病毒，且EG95-(C3d)3重组融合蛋白在Sf9昆虫细胞得到了正确表达，大小约为132 ku，Western blotting鉴定结果显示表达的EG95-(C3d)3重组融合蛋白能与细粒棘球蚴阳性血清产生特异性反应，表明EG95-(C3d)3基因表达产物具有免疫活性。同时表达蛋白对羊棘球蚴病特异性抗体有良好的敏感性。EG95-(C3d)3基因在昆虫细胞获得表达，为原核表达和真核表达EG95-(C3d)3重组融合蛋白的免疫效果的比较，及细粒棘球蚴病的高效检测方法的建立奠定了基础。