| 地衣芽胞杆菌HS10原生质电转化体系的研究 |
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| 引用本文： | 徐 龙,黄文祥,刘红霞.地衣芽胞杆菌HS10原生质电转化体系的研究[J].植物保护,2018,44(3):117-123. |
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| 作者姓名： | 徐 龙 黄文祥 刘红霞 |
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| 作者单位： | 南京农业大学植物保护学院 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(31571992, 31371925) |
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| 摘 要： | 地衣芽胞杆菌Bacillus licheniformis HS10及其粗蛋白对多种病原真菌具有防治效果,为挖掘其生防功能基因,本研究通过对原生质体的制备、再生培养基、渗透压稳定剂、电击参数等试验条件进行优化,建立了地衣芽胞杆菌HS10原生质体电转化法。结果表明最佳转化条件为:转接培养10h达到对数生长后期的菌体,浓缩4倍后,利用终浓度1mg/mL的溶菌酶,于37℃、150r/min酶解20min,酶解效率达到99.34%,1×SMM洗涤3次,调整菌浓度至1.0×108 cfu/mL,并通过1.6kV、5ms的电击后,迅速在SMMP溶液中100r/min、37℃恢复6~10h,涂布于含Kan和Erm的再生培养基DM3平板。将该方法用于突变体库构建的质粒pMarA(8 253bp)和基因敲除质粒pMADΔCP(13 043bp)的大片段质粒转化,分别获得了37cfu/μg DNA和10cfu/μg DNA阳性转化子。该遗传转化体系为地衣芽胞杆菌HS10中相关基因功能的研究提供了技术支撑。
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| 关 键 词： | 地衣芽胞杆菌 原生质体 电转化 质粒 |
| 收稿时间： | 2017/8/10 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2017/9/5 0:00:00 |
Studies on the electroporation system for Bacillus licheniformis HS10 protoplast |
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| XU Long,HUANG Wenxiang,LIU Hongxia.Studies on the electroporation system for Bacillus licheniformis HS10 protoplast[J].Plant Protection,2018,44(3):117-123. |
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| Authors: | XU Long HUANG Wenxiang LIU Hongxia |
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| Affiliation: | College of Plant Protection, Nanjing Agricultural University, Nanjing 210095, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Bacillus licheniformis protoplast electroporation plasmid |
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