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迟缓爱德华氏菌SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用
引用本文:荣小军,廖梅杰,张 正,王印庚,刘智超,李 彬,王 岚,陈贵平.迟缓爱德华氏菌SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法的建立及其应用[J].水产学报,2013,37(12):1829-1838.
作者姓名:荣小军  廖梅杰  张 正  王印庚  刘智超  李 彬  王 岚  陈贵平
作者单位:中国水产科学研究院黄海水产研究所,中国水产科学研究院黄海水产研究所,中国水产科学研究院黄海水产研究所,中国水产科学研究院黄海水产研究所,中国水产科学研究院黄海水产研究所,中国水产科学研究院黄海水产研究所,中国水产科学研究院黄海水产研究所,中国水产科学研究院黄海水产研究所
基金项目:十二五863项目(2012AA10A412-4)、科研院所技术开发研究专项项目(2011EG34219)、国家科技支撑计划课题(2012BAD17B03)、国家自然科学基金项目(30901120, 31202016)和青岛市科技计划项目(11-1-1-11-hy)共同资助
摘    要:根据克隆得到的迟缓爱德华氏菌gyrB基因序列设计并合成一对特异性引物,通用性和特异性检测结果显示所设计的引物具有良好的种间特异性和种内通用性,构建含gyrB基因的重组质粒作为标准品,经过反应体系优化后建立了检测迟缓爱德华氏菌的SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法。结果显示,该方法线性关系良好,在Tm为63℃时,扩增产物的熔解曲线仅有一个单特异峰,扩增所得标准曲线为y=-3.32x 39.38,相关系数为0.998,扩增效率为1.00,最低能检测到60个拷贝。应用建立的方法对人工感染的大菱鲆病样进行了检测,三个被检样品均呈阳性反应,证明该方法具有较好的适用性。实验结果表明所建立的实时荧光定量PCR方法具有特异、敏感、快速、定量的优点,可用于迟缓爱德华氏菌病的快速检测。

关 键 词:gyrB基因  迟缓爱德华氏菌  实时定量PCR  SYBR  Green  I
收稿时间:7/3/2013 12:00:00 AM
修稿时间:2013/9/20 0:00:00

Development of an SYBR Green I real-time PCR assay for detection of Edwardsiella tarda and its application
RONG Xiaojun,LIAO Meijie,ZHANG Zheng,WANG Yingeng,LIU Zhichao,LI Bin,WANG Lan and CHEN Guiping.Development of an SYBR Green I real-time PCR assay for detection of Edwardsiella tarda and its application[J].Journal of Fisheries of China,2013,37(12):1829-1838.
Authors:RONG Xiaojun  LIAO Meijie  ZHANG Zheng  WANG Yingeng  LIU Zhichao  LI Bin  WANG Lan and CHEN Guiping
Affiliation:Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences,,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences,,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences,,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences,,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences,,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences,,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences,,Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences,
Abstract:
Keywords:gyrB gene  Edwardsiella tarda  Real-time PCR  SYBR Green I
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