黄精多糖联合miR-204调控骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的研究

摘要：目的:探讨黄精多糖（PSP）联合微小RNA（miR）-204对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法:分离培养大鼠关节软骨细胞,利用白细胞介素1β（IL-1β）诱导软骨细胞构建骨关节炎软骨细胞模型,用不同浓度(30,120,480 mg·L-1)的PSP干预IL-1β诱导的软骨细胞,分别将miR-204 mimics转染至IL-1β诱导的软骨细胞中,再用PSP处理细胞。采用MTT法与流式细胞术分别检测细胞增殖及凋亡率; ELISA检测肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）的表达水平; Western blot检测细胞周期蛋白1（Cyclin D1）、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3（cleaved-caspase3）、B淋巴细胞瘤-2相关蛋白（Bax）、B淋巴细胞瘤-2（Bcl-2）、磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）/蛋白激酶B（AKT）信号通路相关蛋白表达。结果:与正常对照组比较,IL-1β组软骨细胞存活率与Cyclin D1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白水平显著降低（P<0.05）,细胞凋亡率与TNF-α、IL-6的水平及cleaved-caspase-3、Bax蛋白水平显著升高（P<0.05）;与IL-1β组比较,IL-1β+PSP 30 mg·L-1组、IL-1β+PSP 120 mg·L-1组、IL-1β+PSP 480 mg·L-1组存活率升高（P<0.05）,凋亡率及TNF-α、IL-6的水平降低（P<0.05）;与IL-1β+miR-con组比较,IL-1β+miR-204组存活率升高（P<0.05）,凋亡率及TNF-α、IL-6的水平降低（P<0.05）;与IL-1β+PSP 120 mg·L-1组比较,IL-1β+PSP+miR-204组存活率与Cyclin D1、Bcl-2、p-PI3K、p-AKT蛋白水平升高（P<0.05）,凋亡率、TNF-α、IL-6水平及cleaved caspase-3、Bax蛋白水平降低（P<0.05）。结论:黄精多糖联合miR-204可促进骨关节炎软骨细胞增殖,抑制细胞凋亡,其作用机制可能与激活PI3K/AKT信号通路有关。