过表达CKLF1基因对强直性脊柱炎滑膜成纤维细胞增殖及成骨转化影响的实验研究

目的探索趋化素样因子1 (chemokine-like factor1,CKLF1)对强直性脊柱炎(ankylosingspondyliti,AS)髋关节滑膜成纤维细胞增殖和成骨转化的影响。方法对照组和AS髋关节滑膜组织分别取自我科4例股骨颈骨折和3例重度AS拟行髋关节置换患者。滑膜组织经常规消化后获得单个细胞,并在倒置相差显微镜下进行观察和抗vimentin免疫荧光染色(immunofluorescence,IFC)检测。对上述髋关节滑膜组织及成纤维细胞分别行原位和体外培养,重组腺相关病毒(rAAV)-lacZ、rAAV-hCKLF1转染后21天收集标本。分别采用ELISA、IFC和荧光定量RT-PCR检测细胞增殖、致炎性细胞因子分泌、成骨分化的关键靶基因CKLF1及CCR4的表达。结果第3代正常和AS细胞抗vimentin IFC检测均为阳性,表明分离培养的细胞为成纤维细胞。rAAV-hCKLF1转染后21天,HE染色并计数单位面积下的细胞数、水溶性四氮唑法(WST-1)检测细胞增殖能力和Hoechst 33258检测细胞DNA含量均显示,CKLF1转染促进细胞增殖,且与无病毒转染组、lacZ组相比,差异有统计学意义(P=0.0000,P=0.0260,P=0.0020);正常和AS髋关节滑膜组织及成纤维细胞分泌的致炎性细胞因子(IL-6和TNF-α),均明显升高,且与无病毒转染组、lacZ组相比,差异有统计学意义(P=0.0060、P=0.0020);CKLF1尚能促进AS成纤维细胞表达特异性骨细胞外基质蛋白(OCN和OPN)表达;荧光定量RT-PCR与上述检测结果一致。结论过表达CKLF1促进AS髋关节滑膜成纤维细胞增殖和致炎性细胞因子分泌,增强成骨转化相关靶基因的转录,CKLF1可能在AS关节病理性骨化过程中发挥重要作用。