| hVEGF165四环素调控腺病毒载体的构建及其在大鼠成肌细胞表达 |
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| 引用本文： | 黄新苗,秦永文,沈茜,吴弘,陈少萍,周菲,游晓华.hVEGF165四环素调控腺病毒载体的构建及其在大鼠成肌细胞表达[J].心脏杂志,2006,18(1):35-39. |
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| 作者姓名： | 黄新苗 秦永文 沈茜 吴弘 陈少萍 周菲 游晓华 |
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| 作者单位： | 1. 第二军医大学长海医院心内科,上海,200433
2. 第二军医大学长海医院实验诊断科,上海,200433 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目资助(No.30070750) |
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| 摘 要： | 目的构建表达人血管内皮生长因子165基因(hVEGF165)的四环素调控重组腺病毒,并测定其在原代培养大鼠成肌细胞的表达水平。方法亚克隆hVEGF165全长cDNA到穿梭质粒pTREShuttle2,获得四环素可调控的目的基因表达盒;亚克隆表达盒到BDAdeno-XTMViralDNA,获得重组腺病毒质粒;重组质粒转染HEK293细胞以包装产生具有感染能力的重组腺病毒颗粒AdTRE.VEGF165。hVEGF165重组腺病毒和Tetoff调节病毒共感染原代培养的成肌细胞,酶联免疫法检测目的基因的表达。结果成功构建了能表达hVEGF165的四环素调控的重组腺病毒载体。hVEGF165重组腺病毒(20pfu/cell)和Tetoff调控病毒(20pfu/cell)共感染骨骼肌成肌细胞后5d,ELISA检测显示培养上清中VEGF165蛋白浓度显著高于未感染的细胞培养上清(14.80±1.15ng/ml)×105/(cell·24h)vs(1.39±0.36ng/ml)×105/(cell·24h),P<0.01)]。结论四环素调控表达的腺病毒系统可高效地转导VEGF基因进入哺乳动物细胞;原代培养的骨骼肌成肌细胞感染AdTRE.VEGF165后可高水平地分泌VEGF165蛋白。
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| 关 键 词： | 血管内皮生长因子 成肌细胞 重组腺病毒 基因治疗 |
Construction of tetracycline-regulative adenoviral vector containing human vascular endothelial growth factor 165 gene and its expression in rat myoblast |
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| HUANG Xin-miao,QIN Yong-wen,SHEN Qian,WU Hong,CHEN Shao-ping,ZHOU Fei,YOU Xiao-hua.Construction of tetracycline-regulative adenoviral vector containing human vascular endothelial growth factor 165 gene and its expression in rat myoblast[J].Chinese Heart Journal,2006,18(1):35-39. |
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| Authors: | HUANG Xin-miao QIN Yong-wen SHEN Qian WU Hong CHEN Shao-ping ZHOU Fei YOU Xiao-hua |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | VEGF myoblast recombinant adenoviruses gene therapy |
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