β_2肾上腺素受体基因在Sf9细胞中的表达及纯化

通过密码子优化、昆虫杆状病毒表达系统(Bac-to-Bac)构建、表达条件筛选及镍柱亲和层析,研究β_2肾上腺素受体(β_2 adrenergic receptor,β_2AR)基因(β_2AR)在昆虫细胞Sf9中的高效表达及纯化策略。方法:人工合成改造后的β_2AR基因,将其克隆至转移载体p Fast Bac1中,构建重组杆状病毒表达质粒p Fast Bac1-β_2AR’,转染昆虫细胞Sf9,优化表达条件,采用镍离子亲和层析法纯化重组蛋白并进行活性鉴定。结果:适宜的表达条件为感染细胞使用的感染复数5、感染后表达时间48 h,Western blot分析显示在47 k D左右处出现清晰的特异性条带,与预期结果一致。纯化的受体蛋白纯度大于90%,活性鉴定结果显示该受体蛋白可特异性吸附盐酸克伦特罗、沙丁胺醇及莱克多巴胺3种β激动剂的酶标记物,OD值分别为0.983、0.947和0.912。结论:本研究实现了β_2AR受体在Sf9细胞中的表达,且纯化后的受体蛋白保持了较好的β激动剂亲和活性,为利用β_2AR受体开展β激动剂多残留快速检测技术提供了依据。