| C端带Myc和多聚组氨酸双重标签基因的改构体J-HNP-1在COS-7细胞的转染表达 |
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| 引用本文： | 白晓东,刘贤华,仝青英,张韶峰.C端带Myc和多聚组氨酸双重标签基因的改构体J-HNP-1在COS-7细胞的转染表达[J].中华医院感染学杂志,2006,16(2):129-133. |
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| 作者姓名： | 白晓东 刘贤华 仝青英 张韶峰 |
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| 作者单位： | 武警部队总医院,北京,100039 |
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| 摘 要： | 目的改构α-防御素-1(HNP-1)使其成为一端带J链的改构体J-HNP-1分子,并探索建立能有效表达和分泌J-HNP-1,其表达产物又易于被检测和分离纯化的哺乳动物细胞表达系统。方法利用重组PCR技术,使HNP-1一端带上J链;将J-HNP-1 DNA片段插入哺乳动物细胞表达载体pcDNA3.1(-)/Myc-HisC中,构建出C端带Myc和6×His的rpcDNA3.1(-)/Myc-HisC/J-HNP-1;将此重组真核表达载体导入COS-7细胞,分别从mRNA和蛋白质水平分析J-HNP-1的表达情况,并同步检测细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性。结果采用RT-PCR法从被转染的细胞中扩增出1条约786bp的片段,其大小与预测相符;采用Western印迹法,用抗His抗体检测到细胞可溶性蛋白及培养上清在相对分子质量约24×103处有强反应条带显示;细胞可溶性蛋白及培养上清的抗菌活性检测显示,经rpcDNA3.1(-)/Myc-HisC/J-HNP-1转染的COS-7细胞的可溶性蛋白和培养上清均有明显的抗菌活性。结论α-防御素-1(HNP-1)被成功改构成杀菌肽J-HNP-1;所建立的J-HNP-1哺乳动物细胞表达载体系统能有效表达和分泌活性J-HNP-1。
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| 关 键 词： | 抗菌肽 J链 α-防御素-1 |
| 文章编号： | 1005-4529（2006）02-0129-05 |
| 收稿时间： | 2005-08-26 |
| 修稿时间： | 2005-12-21 |
Expression of Recombinant J-HNP-1 Gene with C Terminal of Double Marks Myc and Poly-histidine in Transfected COS-7 Cells |
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| BAI Xiao-dong,LIU Xian-hua,TONG Qing-ying,ZHANG Shao-feng.Expression of Recombinant J-HNP-1 Gene with C Terminal of Double Marks Myc and Poly-histidine in Transfected COS-7 Cells[J].Chinese Journal of Nosocomiology,2006,16(2):129-133. |
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| Authors: | BAI Xiao-dong LIU Xian-hua TONG Qing-ying ZHANG Shao-feng |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Antimicrobial peptide J chain HNP-1 |
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