| pRluc-hKOR-pcDNA3.1 真核重组质粒的构建及在HEK293细胞中的表达 |
| |
| 引用本文： | 李雅林,白波,陈京,刘有旺,刘海青,路海.pRluc-hKOR-pcDNA3.1 真核重组质粒的构建及在HEK293细胞中的表达[J].中国病理生理杂志,2009,25(10):2078-2080. |
| |
| 作者姓名： | 李雅林 白波 陈京 刘有旺 刘海青 路海 |
| |
| 作者单位： | 1泰山医学院, 山东 泰安 271000； 2山东农业大学，山东 泰安 271018； 3济宁医学院，山东 济宁 272000 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金资助项目，山东省自然科学基金资助项目，山东省科技公关计划资助项目，山东省自然科学基金资助项目 |
| |
| 摘 要： | 目的： 构建与海肾荧光素酶(renilla luciferase，Rluc)融合的人κ型阿片受体（kappa opioid receptor, KOR）的真核表达载体，用于生物发光共振能量转移法检测人KOR与其它受体间的相互作用。方法: 以质粒pcDNA3.1-hKOR为模板，PCR方法扩增人KOR。扩增的人KOR用NotⅠ和XhoⅠ双酶切，同时用这2种酶双酶切质粒pRluc-pcDNA3.1。然后将这2种酶切产物按常规方法连接、转化大肠杆菌Top10。挑取菌落培养，提取质粒，然后进行酶切鉴定，最后进行测序。将测序正确的重组载体用脂质体法转染人胚胎肾（human embryonic kidney 293，HEK293) 细胞，免疫荧光染色，共聚焦显微镜观察。结果: 扩增出了1条约1.2 kb的片段，与预期的人KOR大小相符，质粒酶切结果显示重组质粒 pRluc-hKOR-pcDNA3.1被切成2条片段，其中1条为pRluc-pcDNA3.1载体大小，另1条为目的片段大小。经测序鉴定，序列与GenBank (NM_000912)中的序列高度同源。共聚焦显微镜观察显示，阿片受体主要表达在细胞膜上。结论: 构建成功了pRluc-hKOR-pcDNA3.1重组真核表达载体，此表达载体可用于检测人KOR与其它受体之间的相互作用。
|
| 关 键 词： | 受体 阿片样 κ 重组真核表达载体 HEK293细胞 |
| 收稿时间： | 2008-11-11 |
| 修稿时间： | 2009-2-5 |
Construction of pRluc-hKOR-pcDNA3.1 recombinant eukaryotic expression vector and its expression in HEK293 cells |
| |
| LI Ya-lin,BAI Bo,CHEN Jing,LIU You-wang,LIU Hai-qing,LU Hai.Construction of pRluc-hKOR-pcDNA3.1 recombinant eukaryotic expression vector and its expression in HEK293 cells[J].Chinese Journal of Pathophysiology,2009,25(10):2078-2080. |
| |
| Authors: | LI Ya-lin BAI Bo CHEN Jing LIU You-wang LIU Hai-qing LU Hai |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Receptors opioid kappa Recombinant eukaryotic expression vector HEK293 cells |
| 本文献已被 万方数据 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《中国病理生理杂志》浏览原始摘要信息 |
|
点击此处可从《中国病理生理杂志》下载全文 |
