| 高分子量腈水合酶工程菌生产烟酰胺的工艺建立 |
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| 引用本文： | 郭军玲,王哲,刘中美,周哲敏.高分子量腈水合酶工程菌生产烟酰胺的工艺建立[J].食品与发酵工业,2018(2):8-14. |
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| 作者姓名： | 郭军玲 王哲 刘中美 周哲敏 |
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| 作者单位： | 江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室; |
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| 摘 要： | 为提高表达玫瑰色红球菌(Rhodococcus rhodochrous J1)来源的高分子量腈水合酶大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3)/pET-24a(+)-nhh Brbs Arbs G(BAG)的菌体酶活,建立了合适的烟腈全细胞催化工艺以及重组工程菌的高密度发酵工艺。采用正交试验L_9(3~4)对摇瓶培养基中各组分进行优化,比较烟腈底物流加和底物分批补料工艺,对重组菌进行分批补料高密度发酵培养。培养基优化后其菌体生物量提高到4.42 gDCW/L,细胞比酶活提高到30.91 U/mgDCW;与烟腈底物流加相比,烟腈分批补料工艺更适合烟酰胺的生产,通过此工艺的反应,摇瓶发酵后的BAG能够生产390 g/L烟酰胺;对BAG进行5 L发酵罐分批补料扩大培养,菌体生物量最高达到73.97 gDCW/L(OD600=200),细胞比酶活最高为42.70 U/mgDCW,单位发酵液酶活最高为2 813 U/mL,用较高密度的发酵罐培养后重组菌进行烟腈催化反应,产物质量浓度能达到537 g/L,是已报道的大肠杆菌重组表达腈水合酶产烟酰胺所得终质量浓度的最高水平。
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| 关 键 词： | 腈水合酶 大肠杆菌 全细胞催化 底物分批补料 高密度发酵 |
Establishment of the process of nicotinamide produced by Escherichia coli expressing high molecular mass nitrile hydratase |
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