| 重组柯萨奇病毒构建及其感染性研究 |
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| 引用本文： | 周冬,高孟,高丽美,吴洁,杨宏宏,陈刚,高磊,姜云水,李剑波,李永学,庄昉成.重组柯萨奇病毒构建及其感染性研究[J].国际流行病学传染病学杂志,2019,46(2):93-98. |
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| 作者姓名： | 周冬 高孟 高丽美 吴洁 杨宏宏 陈刚 高磊 姜云水 李剑波 李永学 庄昉成 |
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| 作者单位： | 浙江省医学科学院病毒病研究所,浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室,杭州310053;浙江省医学科学院病毒病研究所,浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室,杭州310053;浙江省医学科学院病毒病研究所,浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室,杭州310053;浙江省医学科学院病毒病研究所,浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室,杭州310053;浙江省医学科学院病毒病研究所,浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室,杭州310053;浙江省医学科学院病毒病研究所,浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室,杭州310053;浙江省医学科学院病毒病研究所,浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室,杭州310053;浙江省医学科学院病毒病研究所,浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室,杭州310053;浙江省医学科学院病毒病研究所,浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室,杭州310053;浙江省医学科学院病毒病研究所,浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室,杭州310053;浙江省医学科学院病毒病研究所,浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室,杭州310053 |
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| 基金项目： | 浙江省医学生物工程疫苗研发重点实验室项目;浙江省科技计划;浙江省重点研发计划;Project for the Medical Biological Vaccine Key Lab of Zhejiang Province;Science and Technology Project of Zhejiang Province;Key Research and Development Project of Zhejiang Province |
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| 摘 要： | 目的纯化柯萨奇病毒(CV)-A6、CV-A16 cDNA,在此基础上将CV-A6-VP(结构蛋白)替换CV-A16-VP构建重组病毒pBM 16A-Re(CV-A16-CV-A6-VP),并研究其感染性,为CV-A6、CV-A16及重组疫苗的研发提供依据.方法提取CV-A6、CV-A16基因组RNA,经RT-PCR得到基因组全长cDNA,PCR后纯化插入至pBM16A-TOPO载体,利用T7聚合酶系统将线性基因组cDNA体外转录得到病毒基因组RNA,纯化后转染Vero细胞,获得重组病毒Re,并对Re进行显微镜观察、基因测序、免疫荧光等方法检测鉴定其感染性.结果构建的CV-A6、CV-A16、Re经电泳鉴定可见约7 500 bp的条带.得到的pBM16A-CV-A6、pBM16A-CV-A16、pBM16A-Re经限制性内切酶双酶切鉴定,可见约7 500 bp的目的条带和约1 800 bp的载体条带.构建的克隆经全基因测序验证与理论序列完全一致.细胞形态学鉴定显示,CV-A16组可见典型肠道病毒所致的细胞病变,CV-A6及Re组则没有明显病变;RT-PCR鉴定也得出相同结果.结论成功构建重组CV-A6、CV-A16和重组病毒Re,重组CV-A16与母本野生型病毒增殖特性基本一致,重组病毒pBM16A-Re丧失细胞感染性.
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| 关 键 词： | 柯萨奇病毒感染 反向遗传技术 重组病毒 感染性 |
Construction of a recombinant coxsackievirus and its infectivity |
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| Affiliation: | (Institute of Viral Diseases,Zhejiang Academy of Medical Sciences,Medical&Biological Vaccine R&D Key Lab of Zhejiang Province,Hangzhou 310053,China) |
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| Abstract: | Zhou Dong;Gao Meng;Gao Limei;Wu Jie;Yang Honghong;Chen Gang;Gao Lei;Jiang Yunshui;Li Jianbo;Li Yongxue;Zhuang Fangcheng(Institute of Viral Diseases,Zhejiang Academy of Medical Sciences,Medical&Biological Vaccine R&D Key Lab of Zhejiang Province,Hangzhou 310053,China) |
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| Keywords: | Coxsackievirus infections Reverse genetic technology Recombinant virus Infectivity |
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