| 利用CRISPR/Cas9系统构建Slc35c1敲除细胞株及其抗蓖麻毒素效应研究 |
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| 引用本文： | 赵雨,翟雅洁,袁蜜蜜,邓亚楠,王勃,王玉霞,王籽橙,段小涛.利用CRISPR/Cas9系统构建Slc35c1敲除细胞株及其抗蓖麻毒素效应研究[J].军事医学,2021,45(11):823-827. |
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| 作者姓名： | 赵雨 翟雅洁 袁蜜蜜 邓亚楠 王勃 王玉霞 王籽橙 段小涛 |
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| 作者单位： | 军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所,北京 100850;军事科学院军事医学研究院毒物药物研究所,北京 100850;烟台大学药学院,山东烟台 264005;解放军总医院第五医学中心,北京 100071 |
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| 摘 要： | 目的 构建稳定敲除小鼠Slc35c1基因的单克隆细胞株,为研究Slc35c1基因抗蓖麻毒素毒性效应奠定实验基础.方法 根据Slc35c1基因序列设计2对sgRNA插入载体lentiCRISPRv2中,构建lentiCRISPRv2-sgRNA质粒;慢病毒包装并感染NIH/3T3细胞,加入嘌呤霉素筛选阳性细胞;T7E1酶切鉴定sgRNA切割效率;利用有限稀释法筛选单克隆细胞并进行RT-qPCR检测及基因组PCR产物测序,确认Slc35c1敲除成功的细胞株;最后通过CCK-8试剂检测蓖麻毒素对野生型和Slc35c1敲除细胞对的抗毒效应差异.结果 测序结果显示sgRNA成功插入载体质粒中,T7E1酶切结果表明两对sgRNA均可高效切割基因组DNA.RT-qPCR及基因组PCR产物测序鉴定出Slc35c1敲除的纯合子细胞株.CCK-8实验结果显示,与野生型细胞相比,敲除Slc35c1使毒素作用NIH/3T3细胞24 h的IC50值由0.45×10-10 mol/L升至2.1×10-10 mol/L.结论 利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除了NIH/3T3细胞中的Slc35c1基因并筛选获得纯合子细胞株,该细胞株可用于抗蓖麻毒素效应的研究.
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| 关 键 词： | CRISPR/Cas9系统 蓖麻毒素 Slc35c1基因 基因敲除 |
Construction of Slc35c1 gene knockout cell line by CRISPR/Cas9 system and its anti-ricin effect |
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| Authors: | ZHAO Yu ZHAI Ya-jie YUAN Mi-mi DENG Ya-nan WANG Bo WANG Yu-xia WANG Zi-cheng DUAN Xiao-tao |
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