| Stxl-A亚单位的原核表达、复性及抗原性鉴定 |
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| 引用本文： | 葛以跃,崔仑标,史智扬,焦永军,曾晓燕,戚宇华,唐震,单云峰,吴涛,汪华.Stxl-A亚单位的原核表达、复性及抗原性鉴定[J].医学分子生物学杂志,2008,5(4). |
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| 作者姓名： | 葛以跃 崔仑标 史智扬 焦永军 曾晓燕 戚宇华 唐震 单云峰 吴涛 汪华 |
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| 摘 要： | 目的 构建志贺毒素1-A亚单位(Stxl-A)原核表达质粒,使其在大肠埃希菌中表达,对表达的重组蛋白进行纯化,并探讨其抗原性及应用价值.方法 以大肠埃希菌0157 DNA为模板扩增Stxl-A基因,重组克隆入原核表达载体pET32a( ),转化大肠埃希菌B121(DE3),异丙基硫代-半乳糖苷(IPTG)诱导表达,包涵体经镍柱柱上复性和纯化,并对纯化产物进行Western印迹鉴定.结果 重组质粒经双酶协鉴定和测序分析后证实构建成功.重组蛋白经十二烷基磺酸钠一聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示,其表达量占细菌总蛋白量的15%左右,主要以包涵体形式存在,通过镍柱柱上复性获得纯化的可溶性Stxl-A蛋白,纯度达95%以上,Western印迹检测显示特异性条带.结论 成功构建了pET32a( )/Stxl-A重组质粒,并获得了具有抗原特异性的可溶性Stxl-A蛋白,为进一步制备抗Stxl-A抗体和研究其生物学功能奠定了基础.
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| 关 键 词： | 大肠埃希菌O157 志贺样毒素 质粒的构建与鉴定 原核表达 |
Prokaryotic Expression, Renaturalization and Antigenic Identification of Shiga Toxin I A Subunit |
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| GE Yiyue,CUI Lunbiao,SHI Zhiyang,JIAO Yongjun,ZENG Xiaoyan,QI Yuhua,TANG Zheng,SHAN Yunfeng,WU Tao,WANG Hua.Prokaryotic Expression, Renaturalization and Antigenic Identification of Shiga Toxin I A Subunit[J].Journal of Medical Molecular Biology,2008,5(4). |
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| Authors: | GE Yiyue CUI Lunbiao SHI Zhiyang JIAO Yongjun ZENG Xiaoyan QI Yuhua TANG Zheng SHAN Yunfeng WU Tao WANG Hua |
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