| HBV rtA181T突变对Huh7细胞自噬的影响 |
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| 引用本文： | 时景仁,郭向华,王洁琳,王珊珊,乔录新,陈德喜.HBV rtA181T突变对Huh7细胞自噬的影响[J].临床肝胆病杂志,2016(11):2107-2111. |
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| 作者姓名： | 时景仁 郭向华 王洁琳 王珊珊 乔录新 陈德喜 |
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| 作者单位： | 首都医科大学附属北京佑安医院,北京市肝病研究所,北京100069 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(81361120401)，首都卫生发展科研专项项目(首发2014-1-1151)，肿瘤侵袭和转移机制研究北京市重点实验室开放课题(2015ZLQX05) |
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| 摘 要： | 目的探讨HBV逆转录酶区A181T(rtA181T)位点突变对Huh7细胞自噬的影响。方法 Huh7细胞分别转染1.3mer HBV野生型质粒(WT组)、1.3mer HBV rtA181T突变型质粒(181T组)及1∶1共转WT和rtA181T突变型质粒(WT+181T组)。Western Blot、免疫荧光检测细胞内HBV表面蛋白(HBs)表达水平,ELISA检测细胞外HBs Ag表达水平;Western Blot分析内源性自噬相关蛋白微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)及P62表达水平,Real-time PCR检测自噬相关基因Atg5 mRNA、Beclin1 mRNA的转录水平;同时转染绿色荧光蛋白LC3后,免疫荧光检测自噬颗粒。计量资料多组间比较采用单因素方差分析,进一步两两比较采用LSD-t检验。结果免疫荧光观察181T组、WT组及WT+181T组细胞内均有HBs表达,Western Blot结果显示181T组细胞内的HBs表达高于WT组和WT+181T组。ELISA检测3组细胞培养上清的HBs Ag水平差异有统计学意义(F=66.739,P0.001),其中181T组细胞外的HBs Ag水平(0.111±0.056)远远低于WT组(3.157±0.490)和WT+181T组(2.240±0.797)(P值均0.001);WT组、181T组和WT+181T组均可见LC3-Ⅱ自噬颗粒聚集,181T组LC3-Ⅱ表达水平高于WT组和WT+181T组,而P62水平低于WT组和WT+181T组,差异均有统计学意义(P值均0.05);181T组自噬相关基因Atg5 mRNA、Beclin1 mRNA转录水平均明显高于WT组和WT+181T组(P值均0.05)。结论 HBV rtA181T突变可导致HBs Ag分泌障碍,并增加Huh7细胞的自噬水平。
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| 关 键 词： | 肝炎病毒 乙型 突变 自噬 |
Effect of hepatitis B virus rtA181T mutation on autophagy of Huh7 hepatoma cells |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hepatitis B virus mutation autophagy |
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