人类生存蛋白启动子的克隆及其在淋巴瘤细胞中的转录活性研究

  目的　克隆人类生存蛋白（Survivin）核心启动子，研究Survivin启动子在人类淋巴瘤细胞Ramos和健康人肝脏细胞Chang Liver中的转录活性。方法　以人类肠基因组DNA为模板，PCR扩增Survivin启动子987 bp片段，将其通过酶切位点连入pGL3-Basic载体构建pGL3-Survivin荧光素酶报告基因载体，通过脂质体转染法转染Ramos和Chang Liver 细胞，通过检测荧光素酶表达水平，比较Survivin启动子在这两种细胞中的转录活性。结果　成功克隆出987 bp的Survivin启动子；双酶切、PCR检测和DNA测序证实pGL3-Survivin载体构建成功；荧光素酶活性检查显示：Survivin启动子在Ramos细胞中的转录活性为阳性对照CMV启动子活性的4.5 %，明显高于在Chang Liver细胞中的0.19 %，在淋巴瘤细胞中具有较高特异性，且在淋巴瘤细胞中的活性明显高于阴性对照pGL3-Basic的0.086 %。结论　Survivin启动子在淋巴瘤细胞中具有较高的特异性，可以作为淋巴瘤细胞基因转染的肿瘤特异性启动子使用。