| 尿激酶受体反义RNA真核表达质粒的构建 |
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| 引用本文： | 董金波,管兴发,王维山.尿激酶受体反义RNA真核表达质粒的构建[J].中国现代医药杂志,2007,9(9):4-8. |
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| 作者姓名： | 董金波 管兴发 王维山 |
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| 作者单位： | 新疆石河子大学医学院第一附属医院骨一科,832000 |
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| 摘 要： | 目的构建尿激酶受体(UPAR)基因pcDNA3.1(-)真核表达质粒,为进一步研究通过UPAR干预类风湿关节炎的发生发展提供实验基础。方法取冰冻保存的小鼠肝癌组织,应用TRIzol法提取总RNA,琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,并用紫外分光核酸蛋白分析仪测定RNA浓度和纯度。使用一步法逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)试剂盒获得目的基因(UPAR)cDNA片段。用CaCl2法诱导感受态细胞。将真核载体pcDNA3.1(-)在多克隆位点处用HindⅢ、BamHⅠ双酶切线性化,切胶纯化回收;将纯化回收的pcDNA3.1(-)线性化载体和UPAR基因片段定向及反向连接,构建以pcDNA3.1(-)为载体的反义UPAR基因表达质粒;转化JM109大肠杆菌;酶切证实的阳性克隆行测序分析。结果琼脂糖凝胶电泳检测RNA完整性,见28S,18S条带完整,而且28S条带亮度为18S的1倍左右,认为RNA完整性良好,并用紫外分光核酸蛋白分析仪测定RNA纯度A260/A280=1.9051,认为RNA纯度良好;RNA浓度为450mg/L;阳性克隆经双酶切后行10g/L琼脂糖电泳,在DNAMarker500bp和5.3bp附近可见两条明显条带,与所需目的片段大小相符,证实为阳性克隆,重组质粒构建成功;DNA测序结果与预期目的片段序列一致。结论反义UPAR真核表达重组质粒构建成功。
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| 关 键 词： | 反义 质粒 尿激酶受体 |
| 修稿时间： | 2007-07-06 |
Construction of pcDNA3.1 (-) -receptor antisense UPAR eukaryotic expressing plasmid |
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| Dong Jinbo,Guan Xingfa,Wang Weishan.Construction of pcDNA3.1 (-) -receptor antisense UPAR eukaryotic expressing plasmid[J].Modern Medicine Journal of China,2007,9(9):4-8. |
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| Authors: | Dong Jinbo Guan Xingfa Wang Weishan |
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| Affiliation: | First Deportment of Orthopaedic Surgery, the First Affiliated Hospital of Medical College, Shihezi University, Xinjiang 832000 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Antisense Plasmid UPAR(urokinase-type plasm inogen activator receptor) |
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