| 三种反义c-myc逆转录病毒表达载体的纯化、病毒包装、滴工测定及整合检测 |
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| 引用本文： | 曾嵘,李进,周生,刘原林,沈继铭.三种反义c-myc逆转录病毒表达载体的纯化、病毒包装、滴工测定及整合检测[J].解剖学研究,1999(1). |
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| 作者姓名： | 曾嵘 李进 周生 刘原林 沈继铭 |
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| 作者单位： | 第一军医大学组胚教研室 广州510515
(曾嵘，李进)，军事医学科学院三所二室 北京100850
(周生，刘原林)，军事医学科学院三所二室 北京100850(沈继铭) |
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| 摘 要： | <正> 为了增强逆转录病毒构建体对靶细胞的转染能力,本实验使用Wizard~(TM)DNA纯化系统对构建成功的三种反义c-myc逆转录病毒表达载体进行了纯化,并经脂质体介导包装PA317细胞,使用NIH3T3细胞测定了PA317抗生细胞克隆的病毒滴度,用neo基因PCR扩增检测外源基因的整合情况.结果显示:1.纯化后的DNA260mm和280nm的OD值均大于1.8,且在琼脂脂糖电泳电中未有明显的RNA出现,说明DNA达到了真核细胞转染的要求,经灭菌和浓度调整后即可用于细胞转染.2.经测定,PA317的病毒滴度达到10~4级,这主要是因为病毒的感染效率不仅直接受病毒载体类型的影响,而且其包装滴度的高低还受靶细胞生长状态、PA317抽样量的高度影响.3.目的基因整合的检测;在所有抽取的转基因克隆细胞的基因组DNA中均能扩增出一条特异的、长430bp的neo基因片断电泳条带,而未转染组则无此条带.在检测基因转染后是否发生了染色体整合上,可用用Southem杂
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