北柴胡转录因子BcbZIP179的基因克隆及原核表达* |
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引用本文: | 韩文静,徐娇,朱楚然,隋春,魏建和.北柴胡转录因子BcbZIP179的基因克隆及原核表达*[J].世界科学技术-中医药现代化,2020,22(9):72-77. |
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作者姓名: | 韩文静 徐娇 朱楚然 隋春 魏建和 |
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作者单位: | 中国医学科学院&北京协和医学院药用植物研究所/中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室/濒危药材繁育国家工程实验室 北京 100193 |
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基金项目: | 国家重点研发计划;四川省科技支撑计划;协同创新项目 |
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摘 要: | 目的 克隆北柴胡转录因子基因BcbZIP179的全长编码序列,原核表达融合蛋白。为进一步研究该基因在北柴胡转录调控中的功能提供理论依据。方法 以北柴胡转录组数据为基础,设计特异性引物,PCR扩增BcbZIP179基因的全长编码序列,利用生物信息学分析软件分析序列特征。利用qPCR方法分析BcbZIP179基因在不同组织器官中的表达及MeJA处理条件下的表达情况。构建原核表达载体,在不同温度和IPTG浓度下,采用2种菌株诱导表达目的蛋白。结果 BcbZIP179编码序列全长432 bp,编码144个氨基酸,BcbZIP179受MeJA诱导,在MeJA处理的北柴胡不定根中,处理前24 h内,表达量逐渐升高,随后表达量降低;BcbZIP179在北柴胡的根、茎、叶、花及果实中均有表达,在果实中的表达量最高;利用大肠杆菌原核表达系统,在16℃和37℃不同温度条件下均获得了带有6×His标签的BcbZIP179融合蛋白。结论 克隆到了北柴胡中的1个bZIP家族的转录因子基因BcbZIP179,在16℃、IPTG 0.05 mmol·L-1条件下,可获得体外表达的蛋白,为制备抗体、分离互作蛋白和调控靶基因进而研究其功能奠定基础。
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关 键 词: | 北柴胡 BcbZIP179 基因克隆 表达分析 原核表达 |
收稿时间: | 2019/12/22 0:00:00 |
修稿时间: | 2021/1/6 0:00:00 |
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