| GST pull-down筛选冠突曲霉MAT的互作蛋白* |
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| 引用本文： | 吴娟,徐宁,张胜花,张小丹,刘缘圆,葛永怡.GST pull-down筛选冠突曲霉MAT的互作蛋白*[J].中国生物工程杂志,2022,42(3):1-12. |
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| 作者姓名： | 吴娟 徐宁 张胜花 张小丹 刘缘圆 葛永怡 |
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| 作者单位： | 贵州大学生命科学学院 贵阳 550025 |
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| 基金项目： | * 国家自然科学基金(31860022);贵州省科技计划资助项目(黔科合基础20201Y056) |
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| 摘 要： | 目的: 冠突曲霉(Aspergillus cristatus)是一种同宗结合菌,它的产孢受渗透压调控,与构巢曲霉的光调控产孢机制存在较大差异。冠突曲霉的有性生殖主要受MAT1-1-1和MAT1-2-1调控,但MAT基因对该菌有性生殖的调控机制仍不清楚。期望筛选得到冠突曲霉MAT的互作蛋白,为深入研究冠突曲霉有性产孢机制奠定基础。方法: 利用GST pull-down联合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术筛选可能与冠突曲霉MAT1-1-1和MAT1-2-1互作的蛋白,结合ProteinPilot和冠突曲霉基因组注释结果进行互作蛋白的注释及GO分析,其中互作蛋白SI65_00917和SI65_03348利用RT-qPCR探索它们与有性发育的联系,并利用酵母双杂交技术初步验证它们与MAT蛋白的互作关系。结果: 成功构建了GST-MAT1-1-1、GST-MAT1-2-1表达载体,诱导表达纯化出目的诱饵蛋白,分别利用诱饵蛋白捕获冠突曲霉总蛋白中的互作蛋白,经分析、筛选共鉴定出与MAT1-1-1互作的蛋白56个,与MAT1-2-1互作的蛋白413个。GO分析表明,这些蛋白参与翻译调控、代谢过程、蛋白质转运及蛋白结合等生物学过程,具有核苷酸结合活性、催化活性、蛋白结合活性;RT-qPCR结果表明互作蛋白SI65_00917可能与有性发育相关。酵母双杂交结果表明,SI65_00917蛋白具有自激活作用,可能是转录因子;SI65_03348蛋白与MAT1-1-1、MAT1-2-1在酵母中均有互作。结论: MAT通过与其他蛋白直接或间接的相互作用调控其有性发育过程。
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| 关 键 词： | 冠突曲霉 MAT GST pull-down 互作蛋白 |
| 收稿时间： | 2021-08-30 |
Screening of Interacting Proteins of MAT in Aspergillus critatus by GST Pull-down |
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| WU Juan,XU Ning,ZHANG Sheng-hua,ZHANG Xiao-dan,LIU Yuan-yuan,GE Yong-yi.Screening of Interacting Proteins of MAT in Aspergillus critatus by GST Pull-down[J].China Biotechnology,2022,42(3):1-12. |
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| Authors: | WU Juan XU Ning ZHANG Sheng-hua ZHANG Xiao-dan LIU Yuan-yuan GE Yong-yi |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Aspergillus critatus MAT GST pull-down Interaction protein |
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