微小 RNA-212调控 TOB2蛋白表达对转化因子 -β1干预 A549细胞诱导肺纤维化及上皮 -间质转化的影响

目的 探讨微小RNA-212(miR-212)对转化因子-β1(TGFβ1)干预A549细胞诱导肺纤维化及上皮-间质转化(EMT)的影响及可能的相关机制.方法 体外培养A549细胞,实验分组:PBS组(常规培养)、TGFβ1组(含有5 ng/mL TGFβ1培养液培养)、TGFβ1+anti-miR-con组(转染anti-miR-con后使用含有5 ng/mL TGFβ1培养液培养)、TGFβ1+anti-miR-212组(转染anti-miR-212后使用含有5 ng/mL TGFβ1培养液培养)、TGFβ1+anti-miR-212+si-con组(共转染anti-miR-212与si-con后使用含有5 ng/mL TGFβ1培养液培养)、TGFβ1+anti-miR-212+si-TOB2组(共转染anti-miR-212与si-TOB2后使用含有5 ng/mL TGFβ1培养液培养).实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)与蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞中miR-212与TOB2的表达水平;甲基噻唑基四唑(MTT)检测干扰miR-212的表达对TGFβ1诱导A549细胞增殖的抑制作用,以及下调TOB2的表达对TGFβ1诱导A549细胞增殖的促进作用;双荧光素酶报告基因检测验证miR-212与TOB2的靶向关系;Western blot检测干扰miR-212的表达或下调TOB2的表达对细胞周期蛋白1(CyclinD1)、波形蛋白(Vimentin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原a1(COL1a1)、上皮钙黏附素(E-cadherin)表达的影响.结果 与PBS组比较,TGFβ1组细胞增殖率显著升高(100.23±5.64)％比(218.34±16.38)％,P<0.05],miR-212(1.00±0.14)比(6.07±0.86)]、CyclinD1(0.54±0.06)比(0.89±0.07)]、Vimentin(0.26±0.04)比(1.09±0.13)]、α-SMA(0.43±0.05)比(0.86±0.07)]、COL1a1(0.57±0.06)比(1.17±0.13)]的表达水平显著升高(P<0.05),而TOB2(1.02±0.12)比(0.44±0.14)]、E-cadherin(0.93±0.09)比(0.47±0.06)]的表达水平显著降低(P<0.05);干扰miR-212的表达可显著抑制TGFβ1诱导A549细胞增殖(P<0.05),抑制CyclinD1、Vimentin、α-SMA、COL1a1表达(P<0.05),促进E-cadherin表达(P<0.05);共转染WT-TOB2的miR-212组荧光素酶活性显著低于miR-con组(P<0.05),共转染MUT-TOB2的miR-212组与miR-con组荧光素酶活性比较差异无统计学意义;相较于TGFβ1+anti-miR-212+si-con组,TGFβ1+anti-miR-212+si-TOB2组A549细胞增殖率显著升高(69.29±8.04)％比(88.27±9.26)％,P<0.05],CyclinD1(0.59±0.08)比(0.75±0.11)]、Vi-mentin(0.42±0.05)比(0.56±0.07)]、α-SMA(0.38±0.06)比(0.53±0.06)]、COL1a1蛋白(0.41±0.05)比(0.55±0.04)]表达水平显著升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达水平显著降低(0.82±0.08)比(0.45±0.06),P<0.05].结论 干扰miR-212的表达可通过上调TOB2的表达而抑制TGFβ1诱导的A549细胞增殖及EMT进而发挥抗肺纤维化作用.