穿心莲茉莉酸甲酯及非生物胁迫下Real-time PCR内参基因的筛选

目的 筛选合适的穿心莲茉莉酸甲酯（MeJA）和非生物胁迫下实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测的内参基因。方法 利用高温、干旱、紫外和MeJA处理的穿心莲转录组数据，挑选到7个候选内参基因肌动蛋白1（ACT1），肌动蛋白2（ACT2），转录延伸因子（EF-1α），甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH），微管蛋白（TUB），多聚泛素酶（UBQ）和18S核糖体RNA（18S），并以上述处理后的穿心莲叶片为实验材料，进行Real-time PCR验证。利用geNorm，NormFinder 和BestKeeper 3种内参稳定性评估软件进行分析，再利用Refinder软件进行综合分析。结果 3种软件基于不同指标进行稳定性评估，结果并不相同，综合分析得出候选内参基因在高温胁迫下表达稳定性顺序依次为UBQ>18S>EF-1α>ACT2>ACT1>GAPDH>TUB；干旱胁迫下表达稳定性顺序依次为ACT1>UBQ>EF-1α>18S>ACT2>GAPDH>TUB；UV胁迫下表达稳定性顺序依次为EF-1α>TUB>ACT2>UBQ>18S>GAPDH>ACT1；MeJA胁迫下表达稳定性顺序依次为ACT1>EF-1α>UBQ>ACT2>18S>TUB>GAPDH。其中18S基因表达丰度较高，不适合作为内参基因。结合转录组数据对4种胁迫中穿心莲内酯合成相关基因酶羟甲基戊二酰-辅酶A合成酶（HMGS）的相对表达水平验证，发现合适内参基因的Real-time PCR结果更可靠。结论 穿心莲高温、干旱、紫外和MeJA胁迫时，UBQ，ACT1和UBQ，EF-1α和TUB，ACT1和EF-1α分别为最适内参基因组合，为后期开展穿心莲高温、干旱、紫外和MeJA处理中基因的功能调控和表达研究提供了参考。

Screening of Reference Genes of Andrographis paniculata Under MeJA and Abiotic Stresses by Real-time Fluorescence-based Quantitative PCR