基于热休克蛋白90靶点的苦参碱衍生物C4对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响 |
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引用本文: | 曾攀科,王立升.基于热休克蛋白90靶点的苦参碱衍生物C4对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响[J].中国实验方剂学杂志,2022,28(23):71-78. |
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作者姓名: | 曾攀科 王立升 |
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作者单位: | 广西大学 医学院,南宁 530004 |
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基金项目: | 国家自然科学基金项目(21262005);广西壮族自治区科学技术厅项目(桂科ZY21195012) |
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摘 要: | 目的 研究基于热休克蛋白90靶点的苦参碱衍生物C4对非小细胞肺癌细胞迁移、侵袭及凋亡的影响。方法 采用分子对接和蛋白免疫印迹法(Western blot)检测苦参碱衍生物C4(0、1、2、4、8 μmol·L-1)对热休克蛋白90(Hsp90)的调控作用;采用噻唑蓝(MTT)比色法检测衍生物C4(0、0.25、0.5、1、2、4、8、16 μmol·L-1)对非小细胞肺癌A549细胞活力的影响;采用克隆形成实验检测衍生物C4(0、2、4、8 μmol·L-1)对A549细胞增殖能力的影响;采用细胞划痕实验检测衍生物C4(0、2、4、8 μmol·L-1)对A549细胞迁移能力的影响;采用Transwell实验检测衍生物C4(0、2、4、8 μmol·L-1)对A549细胞侵袭能力的影响;采用流式细胞术检测衍生物C4(0、2、4、8 μmol·L-1)对A549细胞凋亡能力的影响;采用Western blot检测衍生物C4(0、1、2、4、8 μmol·L-1)对A549细胞蛋白激酶B(Akt)、磷酸化Akt(p-Akt)、表皮生长因子受体(EGFR)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、p-PI3K、胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X基因(Bax)、B细胞淋巴瘤2相关的细胞死亡激动剂(Bad)蛋白表达量的影响。结果 衍生物C4能有效地与Hsp90蛋白通过水介导的氢键网络与天冬氨酸-51(ASN-51)、甘氨酸-135(GLY-135)、苯丙氨酸-138(PHE-138)的残基相互作用,和PHE-138苯环之间的π-π堆积相互作用有助于增强其亲和力,与空白组比较,衍生物C4可以明显的下调A549细胞内Hsp90蛋白表达(P<0.05,P<0.01);与空白组比较,衍生物C4可以明显降低细胞活力(P<0.05,P<0.01);给药24、48、72 h,衍生物C4对A549细胞的半数抑制浓度(IC50)分别为(12.32±0.14)、(7.79±0.16)、(3.26±0.09) μmol·L-1;与空白组比较,衍生物C4(2、4、8 μmol·L-1)使A549细胞克隆形成能力明显下降(P<0.05,P<0.01),且呈浓度依赖性;与空白组比较,衍生物C4可以明显抑制A549细胞的迁移、侵袭能力(P<0.05,P<0.01),其中浓度在8 μmol·L-1时效果最为显著(P<0.01);与空白组比较,衍生物C4可以显著诱导A549细胞发生凋亡反应(P<0.01),在0、2、4、8 μmol·L-1时细胞凋亡率分别为(2.28±0.35)%、(4.97±0.36)%、(8.86±0.50)%、(20.67±0.99)%;与空白组比较,衍生物C4可以明显增加Caspase-9、Bax、Bad蛋白表达量(P<0.05,P<0.01),使PI3K、p-PI3K、p-Akt、EGFR、Bcl-2蛋白表达量发生不同程度降低(P<0.05,P<0.01),Akt蛋白的表达量没有发生明显的变化。结论 衍生物C4发挥抗肿瘤的作用是通过抑制细胞活力、增殖能力、迁移和侵袭能力,并且促进细胞的凋亡反应,其发挥作用的机制可能是通过抑制Hsp90/PI3K/Akt信号通路来实现的。
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关 键 词: | 苦参碱 苦参碱衍生物C4 非小细胞肺癌 热休克蛋白90(Hsp90) 磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)信号通路 |
收稿时间: | 2022/3/6 0:00:00 |
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