| 水产品中副溶血性弧菌PMA-ddPCR活菌定量检测方法的研究 |
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| 引用本文： | 翁文川,管锦绣,谢会,凌莉,陈文锐,冼钰茵,许喜林.水产品中副溶血性弧菌PMA-ddPCR活菌定量检测方法的研究[J].现代食品科技,2019,35(6):273-279. |
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| 作者姓名： | 翁文川 管锦绣 谢会 凌莉 陈文锐 冼钰茵 许喜林 |
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| 作者单位： | 广东检验检疫技术中心,广东省动植物与食品进出口应对技术措施重点实验室,广东广州510623;华南理工大学食品科学与工程学院,广东广州,510640;广州双螺旋基因技术有限公司,广东广州,510320 |
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| 基金项目： | 广东省科技计划项目（2016A040403093）；广州市科技计划项目（201804010500） |
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| 摘 要： | 本研究旨在针对水产品中活的副溶血性弧菌建立一种快速定量的PCR检测方法。基于叠氮溴化丙锭(PMA)在一定光照条件下能抑制死亡菌DNA扩增,以及微滴式数字PCR技术能将检测精度扩展至单分子目标基因,并实现绝对定量的特点,以副溶血性弧菌tlh基因为目的片段设计及筛选适合的特异性引物与探针,优化反应体系,通过对PMA浓度及曝光条件等优化,建立了一种联用PMA-dd PCR技术快速检测水产品中活的副溶血性弧菌的定量检测方法。研究结果显示:选择16μg/m L作为PMA工作浓度,曝光时间为8 min,此条件下能够完全抑制副溶血性弧菌死菌的DNA扩增并对活菌扩增无影响。通过对比PMA-dd PCR和PMA-q PCR的检测低限分别为2×10~1 cfu/mL、2×10~2 cfu/mL,PMA-dd PCR法的灵敏度比PMA-q PCR法的高。应用PMA-dd PCR定量方法检测人工污染的基围虾和小帆立贝这两种海产品,在基围虾中最低可检出1.9×10~1 cfu/g的副溶血性弧菌、在小帆立贝中最低可检出8.9 cfu/g的副溶血性弧菌。该研究为将PCR技术实际应用于水产品中低量污染、活的副溶血性弧菌的定量检测奠定了基础。
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| 关 键 词： | 副溶血性弧菌 叠氮溴化丙锭 微滴式数字PCR |
| 收稿时间： | 2019/2/26 0:00:00 |
Study on PMA-ddPCR Method for Quantitative Detection of Live Vibrio parahaemolyticus in Aquatic Products |
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| WENG Wen-chuan,GUAN Jin-xiu,XIE Hui,LING Li,CHEN Wen-rui,XIAN Yu-yin and XU Xi-lin.Study on PMA-ddPCR Method for Quantitative Detection of Live Vibrio parahaemolyticus in Aquatic Products[J].Modern Food Science & Technology,2019,35(6):273-279. |
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| Authors: | WENG Wen-chuan GUAN Jin-xiu XIE Hui LING Li CHEN Wen-rui XIAN Yu-yin and XU Xi-lin |
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| Affiliation: | (1.Guangdong Inspection and Quarantine Technology Center, Guangdong Key Laboratory of Import and Export Technical Measures of Animal, Plant and Food, Guangzhou 510623, China),(2.School of Food and Engineering, South Chian University of Technology, Guangzhou 510640, China),(3.Guangzhou Double Helix Gene Technology Co. Ltd., Guangzhou 510320, China),(1.Guangdong Inspection and Quarantine Technology Center, Guangdong Key Laboratory of Import and Export Technical Measures of Animal, Plant and Food, Guangzhou 510623, China),(1.Guangdong Inspection and Quarantine Technology Center, Guangdong Key Laboratory of Import and Export Technical Measures of Animal, Plant and Food, Guangzhou 510623, China),(1.Guangdong Inspection and Quarantine Technology Center, Guangdong Key Laboratory of Import and Export Technical Measures of Animal, Plant and Food, Guangzhou 510623, China) and (2.School of Food and Engineering, South Chian University of Technology, Guangzhou 510640, China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vibrio parahaemolyticus propidium monoazide (PMA) droplet digital PCR (ddPCR) |
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