| 大鼠Nogo受体基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定 |
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| 引用本文： | 吕碧涛,袁文,徐盛明,刘百峰,曹莉.大鼠Nogo受体基因RNA干扰慢病毒载体的构建与鉴定[J].第二军医大学学报,2007,28(1):0040-0043. |
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| 作者姓名： | 吕碧涛 袁文 徐盛明 刘百峰 曹莉 |
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| 作者单位： | 1. 第二军医大学长征医院骨科,上海,200003
2. 第二军医大学基础部神经生物学教研室,上海,200433 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，教育部长江学者和创新团队发展计划，上海市医学领军人才项目 |
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| 摘 要： | 目的:构建大鼠Nogo受体(Nogo receptor,NgR)基因RNA干扰慢病毒表达载体,并观察其对293T细胞感染效率.方法: 应用基因工程技术,首先构建携带目的基因siNgR199的慢病毒穿梭质粒表达载体,然后使用慢病毒包装质粒混合物和构建好的慢病毒穿梭质粒共转染293T细胞,转染48 h后收集上清离心过滤后冰浴保存,最后进行病毒滴度测定,与标准病毒液分别感染293T细胞,按MOI值分为5个梯度:1、3、5、10、20,以确定病毒滴度及适合感染的MOI值.其中采用PCR方法对重组载体进行鉴定,利用绿色荧光蛋白作为报告基因,对病毒滴度和感染效率进行检测.结果: 酶切鉴定及PCR结果与病毒载体的预期结果一致,病毒滴度达1×108 ifu/m1,适合感染的MOI值为3.结论: 应用基因工程技术,成功构建了大鼠siNgR199慢病毒表达载体,为应用于治疗脊髓损伤后轴突再生创造了条件.
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| 关 键 词： | 慢病毒 Nogo受体 RNA干扰 |
| 文章编号： | 0258-879X（2007）01-0040-04 |
| 收稿时间： | 2006-11-23 |
| 修稿时间： | 2007-01-09 |
Construction and identification of a recombinant lentivirus harboring RNAi targeting rat Nogo receptor gene |
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| L.Construction and identification of a recombinant lentivirus harboring RNAi targeting rat Nogo receptor gene[J].Academic Journal of Second Military Medical University,2007,28(1):0040-0043. |
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| Authors: | L |
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| Affiliation: | 1. Department of Orthopedics, Changzheng Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200003, China; 2. Department of Neurobiology, College of Basic Medical Sciences, Second Military Medical University, Shanghai 200433 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | lentivirus Nogo receptor RNA interfering |
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