| 人源性抗核抗体Fab片段的筛选及鉴定 |
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| 引用本文： | 陆慧琦,钱新宇,李爱民,罗荣城,韩焕兴.人源性抗核抗体Fab片段的筛选及鉴定[J].第二军医大学学报,2008,29(1):0087-0091. |
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| 作者姓名： | 陆慧琦 钱新宇 李爱民 罗荣城 韩焕兴 |
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| 作者单位： | 1. 第二军医大学长征医院实验诊断科,上海,200003
2. 南方医科大学南方医院肿瘤中心,广州,510515 |
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| 基金项目： | 上海市科委资助项目，广东省科技厅科技计划 |
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| 摘 要： | 目的:制备人源性抗核抗体Fab片段.方法:通过4轮淘筛,富集已构建的人源性抗核抗体Fab片段噬菌体抗体库,间接ELISA法鉴定4轮淘筛后抗核抗体Fab片段噬菌体抗体;提取阳性克隆的噬菌粒DNA,切除gⅢ基因片段,自连接后转化大肠杆菌XL1-Blue,以IPTG诱导表达可溶性人源性抗核抗体Fab片段;应用间接ELISA法及荧光免疫法对表达上清进行鉴定.结果:第4轮洗脱的噬菌体滴度较第1轮增加200条倍,从抗核抗体Fab片段噬菌体库中筛选出2株阳性克隆,切除gⅢ基因后自连的噬菌粒DNA经XhoⅠ单酶切证实连接成功.间接ELISA法检测结果显示:制备的可溶性人源性抗核抗体Fab片段均呈现抗dsDNA阳性,具有抗原特异性;免疫荧光法结果显示:Hep2细胞和猴肝脏组织细胞核显示均质型荧光,绿蝇短膜虫的动基体显示均质型荧光.结论:成功制备具有抗原特异性的可溶性、人源性抗核抗体Fab片段,为高亲和力抗核抗体Fab片段的制备奠定了基础.
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| 关 键 词： | 抗核抗体 单克隆抗体 噬菌体展示肽库 筛选 |
| 文章编号： | 0258-879X（2008）01-0087-05 |
| 收稿时间： | 2007-06-16 |
| 修稿时间： | 2007-12-04 |
Panning and identification of humanized antinuclear antibody Fab fragment |
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| LU Hui-qi,QIAN Xin-yu,LI Ai-min,LUO Rong-cheng,HAN Huan-xing.Panning and identification of humanized antinuclear antibody Fab fragment[J].Academic Journal of Second Military Medical University,2008,29(1):0087-0091. |
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| Authors: | LU Hui-qi QIAN Xin-yu LI Ai-min LUO Rong-cheng HAN Huan-xing |
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| Affiliation: | 1.Department of Laboratory Medicine, Changzheng Hospital, Second Military Medical University, Shanghai 200003, China; 2.Department of Oncology, Nanfang Hospital, Southern Medical University, Guangzhou 510515 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | antinuclear antibodies monoclonal antibody phage display peptide library panning |
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