壳聚糖-DNA纳米粒对肿瘤细胞的转染效率

背景：非病毒载体具有低毒，低免疫反应，靶向性和易于组装等优点已成为目前研究基因转染的热点。目的：评价壳聚糖-DNA纳米粒对肿瘤细胞的转染效率和细胞毒性。设计：观察对比实验。单位：华中科技大学同济医学院环境医学研究所。材料：Zeta电位／粒度分析仪；荧光分光光度计；Hoechst 33258；PLPS-3’EGFP质粒；肺癌细胞A549和人肝癌细胞HepG2。方法：实验于2004—12／2005—12在华中科技大学同济医学院环境医学研究所完成。用绿色荧光蛋白基因做报告基因，复凝聚方法制备壳聚糖绿色荧光蛋白质粒纳米粒。②采用扫描电镜观察制备的纳米粒形态；Zeta电位／粒度分析仪测量纳米粒的粒径和表面电位；酶保护试验检测纳米粒的抗DNA酶降解性能。③体外转染人肝癌细胞HepG2和肺癌细胞A549。分别在24，48和72h后在倒置荧光显微镜下观察细胞转染情况。④纳米粒细胞毒性分析采用四甲基偶氮唑盐试验。主要观察指标：①纳米粒的包封率与理化特征。②纳米粒的细胞转染效率。③纳米粒的细胞毒性。结果：①纳米粒的包封率与理化特征：壳聚糖纳米粒的核酸包封率为91．7％，纳米粒多呈球形，平均粒径149nm，表面电位＋20．5mV。壳聚糖纳米粒能保护DNA不受DNA酶Ⅰ降解。②纳米粒的细胞转染效率：48h后转染率达到高峰，A549转染率为95％；而HepG2只有10％左右。③纳米粒的细胞毒性：纳米粒和壳聚糖溶液均能抑制HepG2和A549生长，壳聚糖溶液对细胞生长的抑制作用强于纳米粒。结论：壳聚糖质粒纳米粒能转染HepG2和A549两种肿瘤细胞，且对两种肿瘤细胞的生长有抑制作用，提示壳聚糖纳米粒能作为DNA的载体．用于肿瘤细胞的转染。

Transfection efficiency of chitosan-DNA nanoparticles on tumor cells