| 携带IL-13基因大鼠肝干细胞系的建立 |
| |
| 引用本文： | 陈刚,韩江,刘永康,艾军华,董家鸿.携带IL-13基因大鼠肝干细胞系的建立[J].中国普外基础与临床杂志,2009,16(4). |
| |
| 作者姓名： | 陈刚 韩江 刘永康 艾军华 董家鸿 |
| |
| 作者单位： | 1. 第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所,西南医院肝胆外科,重庆,400038
2. 成都军区昆明总医院肝胆外科,昆明,650032 |
| |
| 基金项目： | 中国博士后科学基金一等资助课题 |
| |
| 摘 要： | 目的 构建包含IL-13基因片段的慢病毒载体,培养IL-13基因工程大鼠肝干细胞(肝卵圆细胞,HOC,WB-F344细胞),将IL-13基因重组至WB-F344细胞中,使之可分泌大鼠IL-13.方法 人工合成大鼠IL-13基因,利用pWPXL-MOD(TG-005)载体构建包含大鼠IL-13基因片段的质粒; 制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装元件载体质粒,四质粒载体(组成为pRsv-REV、pMDlg-pRRE、pMD2G及目的穿梭质粒)分别进行高纯度无内毒素抽提,共转染293T细胞,培养48 h后,收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液,对其浓缩后得到高滴度的慢病毒浓缩液,定量PCR检测病毒滴度.将构建好的慢病毒感染WB-F344细胞,5 d后采用real-time PCR检测WB-F344细胞中IL-13的表达水平,Western blot检测重组蛋白表达水平.结果 成功构建了IL-13过表达慢病毒载体,并获得IL-13基因工程大鼠肝干细胞; 将IL-13基因重组至WB-F344细胞基因组中,并可在细胞中进行转录,慢病毒感染WB-F344细胞存在IL-13 mRNA表达,可分泌大鼠IL-13.结论 构建的基因工程WB-F344细胞能显著分泌大鼠IL-13,感染后的WB-F344细胞的IL-13表达水平显著高于感染前,满足动物实验要求.
|
| 关 键 词： | 慢病毒 白介素-13 肝卵圆细胞 肝干细胞 载体构建 |
Construction of IL-13 Gene-Modified Rattus Hepatic Stem Cells |
| |
| CHEN Gang,HAN Jiang,LIU Yong-kang,AI Jun-hua,DONG Jia-hong.Construction of IL-13 Gene-Modified Rattus Hepatic Stem Cells[J].Chinese Journal of Bases and Clinics In General Surgery,2009,16(4). |
| |
| Authors: | CHEN Gang HAN Jiang LIU Yong-kang AI Jun-hua DONG Jia-hong |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | |
| 本文献已被 维普 万方数据 等数据库收录！ |
|
