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| 大鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达与培养条件优化 | |
| 引用本文： | 王德解,李彦英,陈宏,方宏清,陈惠鹏.大鼠羧肽酶原B在毕赤酵母中的表达与培养条件优化[J].军事医学科学院院刊,2005,29(3):244-247. |
| 作者姓名： | 王德解 李彦英 陈宏 方宏清 陈惠鹏 |
| 作者单位： | 1. 西北农林科技大学动物科技学院,杨凌,712100;军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 2. 军事医学科学院生物工程研究所,北京,100071 3. 西北农林科技大学动物科技学院,杨凌,712100;徐州师范大学细胞与分子生物学研究所,徐州,221116 |
| 摘 要： | 目的:利用毕赤酵母表达系统,表达大鼠羧肽酶原B(procarboxypeptidaseB,proCPB)蛋白,同时探讨最优表达条件,为规模化发酵生产羧肽酶B奠定基础。方法:以RTPCR法从SD大鼠胰腺细胞中克隆了proCPB基因,将其插入pPIC9载体,转入毕赤酵母Gs115细胞,在甲醇的诱导下表达目的蛋白。结果与结论:首次实现了proCPB在毕赤酵母中的成功表达;通过表达条件的优化,使用BMGY(pH6.0)培养基,添加0.5%(体积比体积)的酪蛋白水解物和3mmol/L的PMSF,于28℃,每隔12h补加0.5%(体积比体积)的甲醇,重组酵母Gs115proCPB表达的重组蛋白可达500mg/L,表达的目的蛋白占总蛋白的94%,活化后的重组CPB相对分子质量为35.1×103,与理论值(35.2×103)极相近。活性测定表明,重组proCPB活化后的CPB的比活力可达110U/mg(CPB参照品为180U/mg)。 |
| 关 键 词： | 羧肽酶B 毕赤酵母 醇氧化酶启动子 发酵培养 |
| 文章编号： | 1000-5501(2005)03-0244-04 |
Optimized expression of rat procarboxypeptidase B in Pichia pastoris |
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| WANG De-jie,LI Yan-ying,CHEN Hong,FANG Hong-qing,CHEN Hui-peng.Optimized expression of rat procarboxypeptidase B in Pichia pastoris[J].Bulletin of the Academy of Military Medical Sciences,2005,29(3):244-247. | |
| Authors: | WANG De-jie LI Yan-ying CHEN Hong FANG Hong-qing CHEN Hui-peng |
| Affiliation: | WANG De-Jie~ |
| Abstract: | |
| Keywords: | carboxypeptidase B Pichia pastoris AOX promotor fermentation culture |
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