禽腺病毒血清4型感染鸡组织中NLRP3基因转录水平的实时荧光定量PCR分析 |
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引用本文: | 郭慧芳,李宁,王白玉,乔麒龙,黄庆,李永涛,王增,赵军.禽腺病毒血清4型感染鸡组织中NLRP3基因转录水平的实时荧光定量PCR分析[J].畜牧兽医学报,2021,52(1):195-201. |
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作者姓名: | 郭慧芳 李宁 王白玉 乔麒龙 黄庆 李永涛 王增 赵军 |
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作者单位: | 河南农业大学牧医工程学院, 郑州 450046 |
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基金项目: | 国家自然科学基金(31772771)。 |
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摘 要: | 旨在分析禽腺病毒血清4型(FAdV-4)感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平,本研究设计鸡NLRP3特异性引物,利用RT-PCR扩增NLRP3基因180 bp片段并克隆至pMD-18T载体,制备重组质粒pMD-18T-NLRP3。以pMD-18T-NLRP3质粒作为标准品进行荧光定量PCR并建立标准曲线。通过反应条件优化,成功建立了检测NLRP3基因的实时荧光定量PCR方法,并利用该方法对致病性FAdV-4感染鸡组织中NLRP3基因的转录水平进行了分析。结果显示,所设计的NLRP3引物可特异性扩增鸡NLRP3基因,建立的实时荧光定量PCR对鸡NLRP3标准质粒的扩增曲线良好,标准品的拷贝数与Cq值呈现良好的线性关系。与对照组相比,NLRP3分子在FAdV-4感染鸡肝和脾中的转录水平极显著高于对照组(P<0.001),在盲肠扁桃体和法氏囊的表达显著高于对照组(P<0.01)。本研究所建立的鸡NLRP3基因SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR可以检测FAdV-4感染鸡不同组织中NLRP3的转录水平;致病性FAdV-4感染所造成的组织炎症损伤与NLRP3分子密切相关。
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关 键 词: | 禽腺病毒血清4型 鸡NLRP3基因 实时荧光定量PCR 组织炎症 转录水平 |
收稿时间: | 2020-06-02 |
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