烟曲霉Aspergillus Fumigatus 3-甾酮-Δ~1-脱氢酶基因的克隆、异源表达和活性鉴定

微生物转化在甾体药物合成中起着不可替代的作用,其中C1,2位脱氢是最为重要的反应类型。以烟曲霉（A.fumigatus）为出发菌株,运用同源序列比对从烟曲霉酸基因簇中钓取出kstDF序列。该基因与玫瑰色热微菌（Ther-momicrobium roseum）DSM 5159的kstD一致性为51%。构建pET28a（＋）-kstDF表达载体,转化大肠杆菌（Escherichiacoli）BL21（λDE3）,获得高表达重组子菌株。经IPTG诱导、SDS-PAGE电泳分析,发现高温（37℃）有利于KstDF蛋白表达,低温（20℃）有利于酶活的保持。该重组菌显示出良好的甾体转化能力,在12 h内完全转化13.3 mg.L-1雄甾-4-烯-3,17-二酮,为构建高效转化3-酮基-4-烯类固醇的基因工程菌奠定了基础。