| 鼠抗人CD20单克隆抗体的制备与鉴定 |
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| 引用本文： | 包红霞,吴春铃,李淑珍,唐晓波,褚晓杰,王爽,张家宁,朱大岭.鼠抗人CD20单克隆抗体的制备与鉴定[J].细胞与分子免疫学杂志,2009,25(5). |
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| 作者姓名： | 包红霞 吴春铃 李淑珍 唐晓波 褚晓杰 王爽 张家宁 朱大岭 |
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| 作者单位： | 1. 哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室,黑龙江,哈尔滨,150081
2. 哈尔滨医科大学药学院生物制药学教研室,黑龙江,哈尔滨,150081;哈尔滨医科大学黑龙江省生物医药工程重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地,黑龙江,哈尔滨,150081哈尔滨医科大学药物与内源性物质代谢省高校重点实验室,黑龙江,哈尔滨,150081 |
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| 基金项目： | 黑龙江省教育厅振兴老工业基地重大科技项目，哈尔滨市科技创新人才研究专项基金，黑龙江省生物医药工程重点实验室研究基金，哈尔滨医科大学医学基础学科青年科学基金 |
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| 摘 要： | 目的:制备CD20融合蛋白及制备CD20的单克隆抗体(mAb),并对其进行特性鉴定.方法:以人单核细胞cDNA文库为模板,构建重组表达质粒pGEX- 4T-1-CD20 (即CD20-GST) 和pET-32a-CD20(即CD20-His).以融合蛋白CD20-GST为免疫源免疫BALB/c雌性小鼠制备(mAb),用间接ELISA法测定抗体的效价,Western blot、免疫荧光鉴定其特异性及免疫组化染色法对mAb相应的抗原进行组织定位.结果:CD20-GST 和CD20-His蛋白在大肠杆菌中可高效表达,经纯化后可获得高纯度的CD20蛋白,经细胞融合得到1株稳定分泌CD20抗体的杂交瘤细胞株,Western blot和免疫组化显示抗CD20 mAb与CD20蛋白具有良好的反应性.结论:成功制备高纯度CD20蛋白并以此为抗原制备了1株能够稳定分泌抗人CD20的鼠mAb的杂交瘤细胞株BD11F4,为进一步研究CD20对非霍奇金淋巴瘤的诊断治疗提供基础.
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| 关 键 词： | 原核表达 融合蛋白 抗体制备 |
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