| 组织蛋白酶B通过瞬时受体电位黏蛋白-1对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体活化的影响 |
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| 引用本文： | 段娟娟,张启芳,黄宗华,曾红梅,柏华.组织蛋白酶B通过瞬时受体电位黏蛋白-1对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3炎症小体活化的影响[J].中国医学科学院学报,2019,41(2):208-215. |
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| 作者姓名： | 段娟娟 张启芳 黄宗华 曾红梅 柏华 |
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| 作者单位： | 1.贵州医科大学第三附属医院神经内科,贵州都匀 5580002 贵州医科大学医学分子生物学重点实验室,贵阳 5500043 贵州医科大学教育部地方和少数民族疾病重点实验室,贵阳 5500044 贵州医科大学第三附属医院检验科,贵州都匀 5580005 贵州医科大学附属医院神经内科,贵阳 5500046 贵州医科大学第三附属医院医学实验中心,贵州都匀 558000 |
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| 基金项目： | 贵州省科技厅课题(黔科合基础2016-1131);贵州省中医药局课题(QZYY-2018-044);国家自然科学基金(81560482) |
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| 摘 要： | 目的 探索在细胞氧化应激模型和特异性基因沉默细胞模型中,组织蛋白酶B(CTSB)通过瞬时受体电位黏蛋白-1(TRPML1)对核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体活化的影响。方法 对体外培养的BV2细胞分别用H2O2、钙敏感性受体激动剂GdCl3、CTSB抑制剂CA-074Me单独或同时处理,用酶联免疫吸附实验方法检测白细胞介素-1β(IL-1β)和半胱天冬酶-1-蛋白;用定量PCR方法检测各组BV2细胞的NLRP3 mRNA。用MTT法检测各组BV2细胞生长活力。用定量PCR方法检测BV2细胞中胱抑素C和TRPML1的mRNA,用Western blot检测TRPML1、CTSB、组织蛋白酶D(CTSD)、组织蛋白酶L(CTSL)、组织蛋白酶V(CTSV)蛋白。针对TRPML1基因靶序列设计特异性小干扰RNA(siRNA),在BV2细胞中建立TRPML1基因沉默细胞株(命名为Tr-si-BV2细胞),通过H2O2处理,再用Western blot检测Tr-si-BV2细胞或对照组细胞中的TRPML1、CTSB和转录因子EB(TFEB)蛋白。结果 用H2O2处理后,BV2细胞中半胱天冬酶-1蛋白和NLRP3 mRNA表达增加,加用GdCl3处理后,BV2细胞中IL-1β显著增加(P=0.0036);使用CA-074Me处理后,NLRP3 mRNA(P=0.037)、半胱天冬酶-1(P=0.021)、IL-1β(P= 0.036)均显著减少。H2O2组和H2O2+GdCl3组的细胞生长较慢。在H2O2浓度为200 μmol/L的处理组,BV2细胞中CTSB mRNA与TRPML1 mRNA、或CTSB与TRPML1蛋白的表达均有相似的变化;沉默TRPML1基因表达水平后能够抑制H2O2诱导的CTSB蛋白表达。组织蛋白酶CTSD、CTSL、CTSV的变化不受H2O2处理浓度高低的影响。在进行TRPML1基因沉默处理的BV2细胞中,H2O2 +siRNA处理组与H2O2处理组比较,CTSB蛋白的表达显著减少(P=0.021)。结论 在小胶质细胞的氧化应激模型中,CTSB具有调节NLRP3炎症小体活化的作用,这种作用有可能通过钙离子通道蛋白TRPML1介导。
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| 关 键 词： | 过氧化氢 组织蛋白酶B 炎症小体 基因沉默 瞬时受体电位黏蛋白-1 |
| 收稿时间： | 2018-09-14 |
Cathepsin B Affects the Activation of Nucleotide-binding Domain and Leucine-rich-repeat-containing Family and Pyrin Domain-containing 3 Inflammasome via Transient Receptor Potential Mucolipin-1 |
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| DUAN Juanjuan,ZHANG Qifang,HUANG Zonghua,ZENG Hongmei,BAI Hua.Cathepsin B Affects the Activation of Nucleotide-binding Domain and Leucine-rich-repeat-containing Family and Pyrin Domain-containing 3 Inflammasome via Transient Receptor Potential Mucolipin-1[J].Acta Academiae Medicinae Sinicae,2019,41(2):208-215. |
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| Authors: | DUAN Juanjuan ZHANG Qifang HUANG Zonghua ZENG Hongmei BAI Hua |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | hydrogen peroxide cathepsin B inflammasome gene silencing transient receptor potential mucolipin-1 |
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