食品用酶毕赤酵母表达载体的构建

目的:构建可用于表达食品用酶的毕赤酵母表达载体pMA,该载体不含非GRAS认证来源的DNA片段。方法:以pPIC9K为模板,通过重叠延伸PCR方法,将来源于大肠杆菌的Amp R抗性标记和复制区ori插入AOX1启动子的SacⅠ位点,最终线性化载体时可用SacⅠ将该来源于大肠杆菌的片段切除。为了避免使用G418等抗性标记并减少载体大小,将原来的HIS4标记和G418标记删除,采用截短了启动子的ADE2标记来实现高拷贝整合。结果:构建获得载体pMA,用SacⅠ线性化后大小仅为3.6 kb;利用pMA表达了一种食品用β-半乳糖苷酶。结论:pMA可用于表达食品用酶,为酵母生产食品用酶奠定了基础。