保存期间血小板中外泌体浓度变化及其对凝血功能的影响

目的 探讨不同保存时间手工血小板中外泌体浓度变化及其对凝血功能的影响。方法 等体积分装血小板，(22±2)℃保存0、3、5 d(D 0、D 3、D 5)后，超速离心法提取血小板外泌体；采用Western blot、透射电子显微镜、纳米流式分析仪对所提外泌体进行表征鉴定。使用纳米流式分析仪检测其颗粒浓度。取不同保存时间血小板外泌体至人新鲜血浆中，全自动凝血分析仪检测血浆凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)。通过Western blot实验进行凝血因子VII含量测定。取不同保存时间血小板外泌体至人新鲜全血中，血栓弹力图仪检测外泌体对全血凝血指标的影响。结果 鉴定结果显示外泌体免疫标志物TSG 101、CD 9特异性表达；所提外泌体呈现双层膜、类杯状结构；其粒径多为60～80 nm之间。D 0、D 3、D 5外泌体浓度分别为(13.86±7.93)×10¹²、(23.69±12.80)×10¹²、(45.81±25.87)×10¹²个/L。与D 0相比，D 3、D 5外泌体浓度显著增加(P<0.01),...