利用双标记PCR产物的量子点检测副溶血性弧菌

副溶血弧菌是一种能引起食源性疾病的重要病原菌,为了对该细菌进行检测,研制一种快速、灵敏、简便的量子点免疫层析试纸条。通过磁珠富集DNA后用双标记的特异性引物(上游引物5’用地高辛标记,下游引物5’用生物素标记)扩增不耐热溶血毒素基因(TLH),进行量子点免疫试纸条的检测。结果表明,荧光定量PCR检测磁珠(Si-MNPs)的捕获率在浓度102~106 CFU/m L均在50%以上,浓度为102 CFU/m L时达到最高捕获率(64%)。在纯培养物及模拟检测中试纸条的检测限均为4×100 CFU/m L,但在模拟检测中T线的显色强度弱于纯培养物的检测,说明鱼肉糜样本的复杂成分对检测灵敏度有一定的影响,但添加高浓度杂菌(阪崎肠杆菌、志贺氏菌)不影响该方法的特异性。方法具有特异性强、灵敏度高,并且操作简便、检测成本低的特点,2 h即可完成,为副溶血弧菌的快速检测提供了有效手段。