用定位突变方法对人脑己糖激酶活性位点的研究 |
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引用本文: | 陈丽蓉.用定位突变方法对人脑己糖激酶活性位点的研究[J].中国生物化学与分子生物学报,1998,14(6):742-745. |
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作者姓名: | 陈丽蓉 |
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作者单位: | 北京大学技术物理系应用化学专业 |
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摘 要: | 哺乳动物己糖激酶Ⅰ的分子量是100kD.目前已经认为是由分子量50kD酵母型己糖激酶通过基因复制和融合进化来的.己糖激酶Ⅰ的C端半分子包含了底物葡萄糖的结合位点即催化位点.X射线衍射结构的结果已经推测在酵母型的己糖激酶分子中Ser-158、Asp-211是和葡萄糖的结合及催化活性有关,这些氨基酸残基相当于人脑己糖激酶Ⅰ分子中的Ser-603、Asp-657,它们正好位于该酶分子的C端半分子中.定位突变这两个氨基酸残基得到4个该酶的C端半分子酶(mini-HKⅠ)的突变体,它们是Ser-603→Cys,Ser-603→Thr,Asp-675→Glu,Asp-675→Val.实验结果指出4个突变体酶的Km值变化不大,但酶活性只保留野生型酶的0.28%~11%,园二色谱分析4个突变体的CD谱与野生型酶基本一致,因此说明二级结构没有变化.这些研究结果和X射线衍射结构的推断是一致的,显示了Ser-603和Asp-657氨基酸残基在该酶结合底物葡萄糖或催化作用上起了重要的作用.
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关 键 词: | 己糖激酶 糖酵解 突变体 |
收稿时间: | 1998-12-20 |
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