| 人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建与表达 |
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| 引用本文： | 胡计华,吴晓云,杨晓菲,郑敏,邓兵,田杰.人野生型和突变型CITED2真核表达质粒的构建与表达[J].解放军医学杂志,2012,37(4):300-303. |
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| 作者姓名： | 胡计华 吴晓云 杨晓菲 郑敏 邓兵 田杰 |
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| 作者单位： | 1. 400014,重庆 重庆医科大学附属儿童医院心脏中心
2. 400014,重庆 儿童发育疾病研究教育部重点实验室、儿科学重庆市重点实验室、重庆市儿童发育重大疾病诊治与预防国际科技合作基地 |
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| 基金项目： | 重庆市卫生局医学科研计划(2009-2-259);重庆市自然科学基金(2008BB5071);国家人力资源和社会保障部留学人员科技活动择优资助启动项目[渝人社办(2009)116号]~~ |
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| 摘 要： | 目的 构建人转录辅助因子CITED2突变型(c.573-578del6)及野生型真核表达质粒并检测两种重组质粒CITED2蛋白的表达情况.方法 分别以健康儿童和CITED2基因突变的先天性心脏病患儿血细胞DNA为模板,PCR定向克隆扩增野生型和突变型CITED2编码链,分别T/A克隆至pMD19-T simple质粒上,筛选出野生型和突变型CITED2的T载体重组质粒.应用DNA重组技术将T载体重组质粒上的CITED2基因片段亚克隆入真核表达载体pEGFP-C1,构建pEGFP-C1-wtCITED2和pEGFP-C1-mtCITED2真核表达质粒,并分别转染至HEK293细胞,24h后在荧光显微镜下观察质粒转染情况,48h后应用流式细胞仪检测转染效率,Western blotting检测CITED2蛋白的表达.结果 成功构建了人野生型pEGFP-C1-wtCITED2和突变型pEGFP-C1-mtCITED2真核表达质粒.转染至HEK293细胞后24h,在荧光显微镜下可观察到各转染组EGFP的表达,转染后48h流式细胞仪检测转染效率为50％ ～ 60％,Western blotting检测可见CITED2蛋白与EGFP的融合表达.结论 成功构建了人转录辅助因子CITED2突变型及野生型真核表达质粒,并检测到CITED2蛋白的表达.
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| 关 键 词： | 基因 CITED2 突变 心脏缺损 先天性 真核表达质粒 |
Construction and expression of human wild-type and mutant CITED2 in eukaryotic expression plasmid |
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| HU Ji-hua
,
WU Xiao-yun
,
YANG Xiao-fei
,
ZHENG Min
,
DENG Bing
,
TIAN Jie.Construction and expression of human wild-type and mutant CITED2 in eukaryotic expression plasmid[J].Medical Journal of Chinese People's Liberation Army,2012,37(4):300-303. |
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| Authors: | HU Ji-hua WU Xiao-yun YANG Xiao-fei ZHENG Min DENG Bing TIAN Jie |
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| Affiliation: | 1Department of Cardiovascular Center,Children’s Hospital of Chongqing Medical University,Chongqing 400014,China 2Ministry of Education Key Laboratory of Child Development and Disorders,Key Laboratory of Pediatrics in Chongqing,Chongqing International Science and Technology Cooperation Center for Child Development and Disorders,Chongqing 400014,China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | genes CITED2 mutation heart defects congenital eukaryotic expression vector |
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