人尿激酶原cDNA在中国仓鼠卵巢细胞(CH0)中高效表达研究

通过构建高效表达载体，改进转染方法，与二氢叶酸还原酶(dhfr)基因共扩增等手段在CH0细胞内高效表达了人尿激酶原(Pr0-UK)cDNA。首先将pro—UK cDNA插入到sR α启动子的下游，构建成表达质粒pMGl0102，在cos－7细胞内进行暂时性表达，结果表明此启动子的表达水平比SV40早期启动子高约5倍。然后将质粒pMG10102和pSV2－dhfr线性化后用磅酸钙共沉淀法转染CH0－dhfr-细胞，经一系列筛选后获得20个能表达pro—UK的细胞克隆，纤维蛋白溶解平板法(FAPA)测定表达水平为12．5—100IU／10⁶cells／d．再经MTX加压共扩增，得到9株高表达细胞系，其中最高的表达水平达到400—500Iu／10‘cells／d。2—3个月连续传代，表达水平未下降，表明细胞株是稳定的。Western Blot分析证明细胞分泌的重组pro－UK具有与天然pro—UK相同的分子量，而且培养液中不加蛋白酶抑制剂时，分泌的重组UK大部分为单链(60％以上)。