副猪嗜血杆菌AfuA-ELISA抗体检测方法的建立与应用

为建立一种特异性强、灵敏度高的副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPS）ELISA抗体检测方法，为副猪嗜血杆菌病的诊断及免疫抗体检测提供技术支撑，首先重组表达了HPS 2个具有免疫原性的蛋白（HbpA、AfuA），随后对HbpA、AfuA进行初筛，选择AfuA作为最佳包被蛋白。通过优化AfuA-ELISA反应条件，确定了最佳抗原包被质量浓度为5μg/mL，最佳封闭液为5%脱脂乳溶液，最佳样品稀释液为2%BSA溶液，最佳样品孵育时间为30 min，最佳样品稀释度为1:25，最佳酶标二抗稀释度为1:20 000，最佳酶标二抗孵育时间为30 min，最佳底物孵育时间为10 min。特异性试验显示，建立的AfuA-ELISA方法对猪其他常见病原阳性血清的检测结果均为阴性，表明其具有良较好的特异性。对300份临床样品进行检测，AfuA-ELISA方法分别检出阳性、阴性血清177、123份，与商业化试剂盒的阳性、阴性符合率分别为90.0%、87.5%，总体符合率为89.0%。结果表明，本研究建立的AfuA-ELISA方法具有特异性强、灵敏度高，与商业化试剂盒符合率高的优点，可...