台兰 ISSR-PCR 反应体系的建立与优化 |
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引用本文: | 王朝雯,王云艳,肖春宏,孙小琴,杨柏云.台兰 ISSR-PCR 反应体系的建立与优化[J].安徽农业科学,2014(15):4583-4586,4590. |
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作者姓名: | 王朝雯 王云艳 肖春宏 孙小琴 杨柏云 |
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作者单位: | 临沧师范高等专科学校数理系;南昌大学生命科学与食品工程学院; |
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基金项目: | 国家环保总局项目(20061A0013) |
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摘 要: | 目的]建立台兰稳定可靠的ISSR-PCR分子标记反应体系。方法]用改良的CTAB法提取叶片的基因组DNA,并对影响台兰ISSR-PCR反应体系的主要成分进行筛选和优化。结果]台兰的ISSR-PCR优化反应体系为:25μl PCR反应体积中,2.5μl 10×PCR buffer,2.0 mmol/L MgCl2,100 ng模板DNA,0.5 mmol/L dNTPs,0.22 U Taq DNA聚合酶,0.4μmol/L引物,15.78μl双蒸水。最佳扩增程序为:94℃预变性5 min,然后进行40个循环:94℃变性30 s,复性温度根据各引物的TM值略低1~2℃,30 s,72℃延伸50 s,循环结束后72℃延伸7 min。结论]台兰ISSR-PCR优化反应体系为今后利用ISSR技术进行台兰种质资源的遗传多样性分析奠定了技术基础。
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关 键 词: | 台兰(Cymbidium floribundum var.pumilum) ISSR分子标记 ISSR-PCR反应体系 |
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