沙门菌tHDA等温扩增检测方法的建立

目的建立基于依赖耐热解旋酶核酸等温扩增(t HDA)的沙门菌快速检测方法。方法从Gen Bank数据库下载沙门菌侵袭蛋白A(inv A)基因,比对确定保守区并设计t HDA引物,并对引物浓度、硫酸镁以及氯化钠浓度等反应条件进行优化。同时评价方法的特异性和灵敏度,并检测模拟样本和真实样本以验证方法的可靠性。结果建立的沙门菌t HDA检测体系经过优化,结果显示仅沙门菌菌株呈现特异性电泳条带,而志贺菌、副溶血弧菌、金黄色葡萄球菌、大肠杆菌O157∶H7、霍乱弧菌等其他5种肠道细菌均为阴性,特异性好;t HDA法检测沙门菌纯培养物的灵敏度为19cfu/μl,检测模拟样本的灵敏度为260 cfu/μl。采用t HDA方法检测18份真实样本,共检出9份沙门菌阳性,与国标法检测结果一致。结论沙门菌t HDA检测方法快速、灵敏、特异,在食源性疾病检测及监测中具有重要的技术优势。