显微注射抗冻剂对牙鲆(Paralichthys olivaceus)胚胎毒性及冷敏感性的影响

摘要 鱼类胚胎冷冻保存经过多年研究，尽管有所突破，但目前仍未达到应用水平，其主要原因是由于鱼类胚胎体积大、卵膜通透性差等特点，导致传统的平衡法，无法使抗冻剂足够、有效的进入胚胎内部起到保护胚胎的作用。而在鱼类胚胎冷冻保存中利用显微注射技术，可直接将抗冻剂注射到鱼类胚胎卵黄囊内，这一定程度上弥补了普通平衡法的不足，提高抗冻剂对胚胎的保护程度。本研究主要对抗冻剂的选择、抗冻剂对牙鲆胚胎的注射剂量、注射浓度、以及注射后牙鲆胚胎的冷敏感性进行了比较分析。结果表明：1、牙鲆胚胎较适宜的显微注射剂量为750pl。2、几种抗冻剂注射牙鲆胚胎后的毒性大小相对排列为PVP>蔗糖，DMSO > MeOH > PG，其中注射PG获得的胚胎成活率和孵化率最高，注射PVP获得的胚胎成活率和孵化率最低，而PG与MeOH组成混合抗冻剂PM毒性更低获得的胚胎成活率和孵化率更高。而任何一种抗冻剂均随着浓度的增加其毒性随之增加。3、另外，在冷敏感实验中，显微注射6M的PM的胚胎胚胎，应用程序化法处理，以2℃/min的速率降至-20℃，平衡10min后解冻处理，发现注射PM的胚胎低温处理后成活率为25.07±1.57%，而6M的PM五步平衡法同步处理的对照组胚胎成活率为20.88±2.84%，说明显微注射的胚胎冷敏感性一定降低。

Study on toxicity and chilling sensitivity of flounder Paralichthys olivaceus embryos microinjected cryoprotants