| 基于3A组装的多拷贝基因策略优化重组水蛭素变体Ⅲ的生产 |
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| 引用本文： | 王亚丽,刘秀霞,杨艳坤,白仲虎.基于3A组装的多拷贝基因策略优化重组水蛭素变体Ⅲ的生产[J].食品与发酵工业,2023(16):1-8. |
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| 作者姓名： | 王亚丽 刘秀霞 杨艳坤 白仲虎 |
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| 作者单位： | 1. 江南大学粮食发酵与食品生物制造国家工程研究中心;2. 江南大学工业生物技术教育部重点实验室;3. 江南大学生物工程学院 |
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| 摘 要： | 水蛭素变体Ⅲ(Hirudin varidantⅢ,Hv3)是一种从水蛭中提取的活性成分，在预防和治疗白内障方面具有潜在作用。为了制备足量Hv3用于进一步的临床前应用研究，该研究开发了一种在谷氨酸棒杆菌(Corynebacterium glutamicum)中高效、稳定表达重组水蛭素变体Ⅲ(recombinant Hirudin varidantⅢ, Rhv3)的办法。首先，在C.glutamicum中构建含Ptac启动子和CspA信号肽的Rhv3分泌表达菌株，比较其在不同培养基中的表达情况。结果表明在BHI培养基中Rhv3活性最高，达到3.02×103 ATU/L。为进一步提升Rhv3产量，通过核糖体结合位点(ribosome binding site, RBS)筛选，选用RBS1应用于Rhv3多拷贝菌株构建和表达。然后利用3A组装技术构建含不同信号肽和不同拷贝数的Rhv3分泌表达菌株进一步优化其产量。通过放大发酵培养，Rhv3产量达到1.89 g/L,活性达到10.91×103 ATU/L。最后利用镍柱对Rhv3进行简单纯化，其纯度达到90...
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| 关 键 词： | 重组水蛭素变体Ⅲ(recombinant Hirudin varidantⅢ Rhv3) 核糖体结合位点(ribosome binding site RBS) 多拷贝 信号肽 谷氨酸棒杆菌 |
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