慢病毒介导的GFP转染对小鼠骨髓间充质干细胞表型、增殖和分化能力的影响 |
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引用本文: | 李燕,陆伟,竺丽梅,邵燕,陈诚,刘巧,韩晓冬.慢病毒介导的GFP转染对小鼠骨髓间充质干细胞表型、增殖和分化能力的影响[J].南京大学学报(自然科学版),2014(6). |
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作者姓名: | 李燕 陆伟 竺丽梅 邵燕 陈诚 刘巧 韩晓冬 |
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作者单位: | 南京大学医学院;江苏省疾病预防控制中心慢性传染病防制所; |
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基金项目: | 国家自然科学基金(81301448,81301448,3120040);江苏省疾病预防控制中心重点人才项目(JKRC20110029) |
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摘 要: | 运用慢病毒(Lentivirus)载体构建绿色荧光蛋白(GFP)在小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)中的转染体系,检测转染后MSCs的表型和增殖能力,并诱导其向成肌细胞分化,检测此转染体系对MSCs细胞表型、增殖和分化能力的影响.骨髓细胞悬液破红后贴壁法培养MSCs,采用流式细胞术鉴定细胞表面标记,鉴定MSCs纯度;Lentivirus-GFP以1、10、50和100的感染复数(MOI)转染MSCs,作用48h后流式细胞术及免疫荧光法检测转染效率和表达的荧光强度;MTT法检测转染后MSCs的细胞活力.诱导MSCs-GFP向成肌细胞分化,蛋白印记法(WB)检测成肌细胞特异性蛋白desmin和α-SMA的表达.流式细胞术检测结果显示,培养的MSCs表达CD44、CD90和CD105,不表达CD34、CD45和CD188,符合干细胞特性.MOI为1、10、50和100的转染效率分别为23.45%、93.51%、95.44%和95.55%,MOI为10时,转染效率较高,且对MSCs活力无明显影响.MSCs-GFP体外经成肌细胞诱导分化后,表达特异性抗原desmin和α-SMA.表明本研究成功构建了小鼠骨髓来源MSCs的Lentivirus-GFP转染体系,有效标记了MSCs细胞,且此标记对MSCs的表型、增殖和分化能力等细胞生物学特性无明显影响.
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关 键 词: | 慢病毒(Lentivirus) 绿色荧光蛋白(GFP) 小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs) 转染 组织工程 |
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