癌基因iASPP-SV参与乳腺癌的形成 |
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引用本文: | 董一楠,孔凡铭,张新伟,魏枫,孙倩.癌基因iASPP-SV参与乳腺癌的形成[J].中国癌症杂志,2016(10):831-839. |
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作者姓名: | 董一楠 孔凡铭 张新伟 魏枫 孙倩 |
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作者单位: | 天津医科大学肿瘤医院研究所免疫研究室,国家肿瘤临床医学研究中心,天津市“肿瘤防治”重点实验室,天津市肿瘤免疫与生物治疗重点实验室,天津300060 |
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基金项目: | 天津市自然科学基金项目(14JCYBJC27100,13JCQNJC10400,14JCYBJC25500)。 |
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摘 要: | 背景与目的:p53凋亡刺激蛋白抑制剂(inhibitor of apoptosis-stimulating protein of p53,iASPP)属于ASPP家族成员,其与p53结合,抑制p53靶基因的转录活性,抑制细胞凋亡,与肿瘤形成相关。先前该研究所在课题组发现了iASPP的一个新亚型iASPP剪切变异体(iASPP splice variant,iASPP-SV),其是包含407个氨基酸残基的核蛋白,能与p53结合、抑制p53的转录活性,但是其与乳腺癌细胞增殖的作用还不清楚。因此,该研究旨在探讨iASPP-SV在乳腺癌发生、发展中的作用。方法:用5’-基因末端快速扩增(rapid ampliifcation of cDNA ends,RACE)方法检测乳腺癌细胞系MCF-7的iASPP-SV mRNA的5’末端序列。将pFLAG-iASPP-SV和pFLAG-iASPP(828)分别转染HEK 293细胞,采用蛋白质]印迹法(Western blot)检测HEK293细胞及8种人类肿瘤细胞iASPP-SV的表达情况。建立稳定表达FLAG-iASPP-SV和FLAG-iASPP(828)的NIH 3T3细胞系,细胞增殖分析、克隆形成实验和软琼脂集落形成实验检测iASPP-SV、iASPP(828)是否促进细胞增殖、是否是癌基因。用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time lfuorescent quantitative polymerase chain reactive,RTFQ-PCR)的方法检测原发性乳腺癌iASPP-SV和iASPP(828) mRNA表达水平,确定人乳腺癌中iASPP-SV是否上调。用荧光素酶报告基因实验检测iASPP-SV、iASPP(828)、p53与NF-κB/p65的关系。结果:5’-RACE方法显示,MCF-7细胞中的iASPP-SV由RAI序列(DQ986418.1)编码。Western blot实验显示,多种人类肿瘤细胞系表达内源性iASPP-SV。细胞增殖分析、克隆形成实验和软琼脂集落形成实验证实iASPP-SV与iASPP(828)能促进肿瘤细胞增殖,是癌基因。RTFQ-PCR实验显示,p53野生型乳腺癌组织iASPP-SV表达水平的中位值比p53突变型显著升高。荧光素酶报告基因实验证实iASPP-SV、iASPP(828)能抑制NF-κB/p65转录,因此iASPP可能是双功能蛋白。结论:iASPP-SV可能作为乳腺癌治疗的有效靶点。
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关 键 词: | p53凋亡刺激蛋白抑制剂 p53凋亡刺激蛋白抑制剂剪切变异体 p53 NF-κB 乳腺癌 |
iASPP-SV,as an oncogene,participates in breast tumorigenesis and progression |
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Abstract: | |
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Keywords: | Inhibitor of apoptosis-stimulating protein of p53 Inhibitor of apoptosis-stimulating protein of p53 splice variant p53 NF-κB Breast cancer |
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