| PRRSV细胞受体CD163 SRCR5-SRCR6多克隆抗体的制备 |
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| 引用本文： | 马玉萍,孔 宁,王向鹏,等. PRRSV细胞受体CD163 SRCR5-SRCR6多克隆抗体的制备[J]. 西北农林科技大学学报(自然科学版), 2014, 42(4): 1-6,14 |
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| 作者姓名： | 马玉萍 孔 宁 王向鹏 等 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物医学院 预防兽医学系;西北农林科技大学 动物医学院 预防兽医学系;西北农林科技大学 动物医学院 预防兽医学系 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（U0931003/L01）；国家“863”高技术研究发展计划项目（2011AA10A208） |
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| 摘 要： | 【目的】制备鼠抗猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)细胞受体CD163SRCR5-SRCR6多克隆抗体。【方法】提取PAM细胞总RNA,通过RT-PCR方法获得CD163SRCR5-SRCR6(第1 417~2 136bp,共720个bp)基因,将其克隆到pET-28a(+)载体上,构建重组表达载体pET-28a(+)-CD163,经酶切、PCR鉴定和测序验证后转化大肠杆菌,在BL21(DE3)中诱导重组目的蛋白表达,然后用Ni-NTA方法纯化目的蛋白,免疫Balb/c小鼠制备多克隆抗体,通过间接ELISA和IFA方法检测多克隆抗体效价,并初步鉴定多克隆抗体血清结合细胞及阻断PRRSV感染细胞的活性。【结果】克隆了720bp的CD163SRCR5-SRCR6基因,成功构建了pET-28a(+)-CD163重组表达载体;SDS-PAGE结果表明,CD163SRCR5-SRCR6重组蛋白被成功诱导并以包涵体形式表达;Western blot结果表明,重组蛋白具有良好的免疫原性,间接ELISA方法测得免疫Balb/c小鼠制备的抗CD163SRCR5-SRCR6重组蛋白的多克隆抗体效价可达105;IFA试验结果显示,制备的抗CD163SRCR5-SRCR6重组蛋白的多克隆抗体可与Marc-145细胞结合,且在1∶20、1∶40倍稀释时,能部分阻断高致病性PRRSV SD16毒株感染Marc145细胞。【结论】用大肠杆菌原核表达系统成功诱导表达了CD163SRCR5-SRCR 6重组蛋白,用重组蛋白免疫小鼠获得了高效价多克隆抗体,其可以结合细胞并阻断PRRSV感染细胞。
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| 关 键 词： | PRRSV；CD163；CD163 SRCR5-SRCR6重组蛋白；多克隆抗体 |
| 收稿时间： | 2013-04-01 |
Preparation of polyclonal antibodies against PRRSV cellular receptor CD163 SRCR5-SRCR6 |
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| MA Yu-ping,KONG Ning and WANG Xiang-peng,et al. Preparation of polyclonal antibodies against PRRSV cellular receptor CD163 SRCR5-SRCR6[J]. Journal of Northwest A&F University（Natural Science Edition）, 2014, 42(4): 1-6,14 |
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| Authors: | MA Yu-ping KONG Ning WANG Xiang-peng et al |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | PRRSV CD163 gene protein encoded by CD163 SRCR5-SRCR6 gene polyclonal antibody |
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